生物化学与分子生物学基础实验单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级生物化学与分子生物学基础实验单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级生物化学与分子生物学基础实验单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级生物化学与分子生物学基础实验

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级原位杂交实验方法适用方法荧光检测系统过氧化物酶检测系统碱性磷酸酶检测系统石蜡切片冰冻切片细胞涂片和细胞爬片1mRNA 原位杂交前实验准备1无RNA酶水的处理2无RNA酶载玻片的处理3标本的防RNA酶的固定4探针的稀释和保存5DNA探针需变性2原位杂交溶液的配制1预杂交液和杂交液的配制220Xssc 2Xssc 0.2Xssc缓

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级荧光定量PCR技术讲座------分子生物学实验技术系列讲座Ⅲ张志坤 20100910大纲一荧光定量PCR技术的基础理论二引物及Taqman探针的设计三内参基因的选择四反应体系的优化五实验方案的选择六误差分析及操作规范七实验中污染的防控八实验结果的分析一荧光定量PCR技术的基础理论1荧光定量PCR技术概论 荧光定

转基因植株的GUS染色1X-Gluc 母液：100 mg X-Gluc溶于5 ml DMF中 2基液：50 mM PBS pH7.0(NaH2PO4 50 mM 0.78 g100 ml Na2HPO4 50 mM 1.791 g100 ml)溶解EDTA?2Na(10 mM 372 mg) Triton-100(0.1100 μl) 铁氢化钾(0.5 mM 16.5 mg)亚铁氢化钾(

RT—PER：1取2ulRNA模板70℃预变性10min2冰浴5 min3按顺序加入以下试剂：(20ul体系)25 mmol／L的MgCl2 4ul逆转录缓冲液 2ul10 mmol／LdNTP 2ulRNase 0.5

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第一部分 碱裂解法提取质粒一实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒 提纯的思路质粒的特性：共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质：　蛋白　基因组DNA　脂类及小分子杂质　RNA 二实验原理 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们在碱性pHDNA变性恢复中性时线性染色体DNA不能准确复性

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实 验 三DNA片段的回收(续)取上次回收的DNA片段(乙醇沉淀中)12000rpm离心10mins弃上清(等待时配置琼脂糖凝胶)用75乙醇洗涤沉淀12000rpm离心5mins弃上清点动离心(Short)5秒小心吸去EP管底部残留液体(严禁碰触有DNA沉淀的区域)空气干燥10mins加入10uL TE 溶解回收产物分别标记组

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级电子分析天平0.01mg-100g(左 德国美特勒)0.1mg-200g(右 上海奥豪斯)试剂配制样品定量称量紫外分光光度计测定核酸含量蛋白质含量细菌生长密度紫外透射仪观测琼脂糖凝胶电泳的结果台式高速冷冻离心机德国effendorf最高转速25000rpm感受态细胞的制备台式高速离心机德国eppendorf最高转速12500r