ELISA试剂配制及实验流程ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称以双抗体夹心法举例说明试剂配制：　　(1)　包被缓冲液(PH9.6 0.2 0.05M 碳酸盐缓冲液)：　　　　　　Na2CO31.59g　　　　　　NaHCO3　 2.93g　　　　　　加蒸馏水至1000ml(用时稀释成1x

ELISA试剂及溶液配制①包被液：0.05molL碳酸盐缓冲液(pH9.6)0.75g碳酸钠1.46g碳酸氢钠加去离子水定容至500ml②0.02molL磷酸盐缓冲液(pH7.4)0.2g磷酸二氢钾2.90g磷酸氢二钠8g氯化钠加去离子水定容到1000ml③抗体稀释液：0.02molL PBS(pH7.4)0.2BSA0.2gBSA加配好的0.02molL磷酸盐缓冲液溶解定量至100g④封闭

ELISA实验中本底及假阳性产生的原因分析1. 基因工程抗原与合成肽抗原的区别1.1 基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原多以大肠杆菌或酵母菌为表达系统该类抗原与合成肽相比具有以下特点：a.分子量大合成肽采用化学方法制备由于工艺的局限合成数量有限只能达到数百个氨基酸而利用基因工程制备的抗原分子量更大b.稳定性好包被的抗原的稳定性可使试剂盒的效期得到保证早期以合成肽为包

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级ELISA综合性实验一ELISA检测全过程包被封闭最佳工作浓度的确立检测预实验正实验— 与固相载体结合的抗原或抗体称为免疫吸附剂— 将抗原或抗体的固相化的过程称为包被 — 最常用的包被液为pH9.6的碳酸盐缓冲液包被coating封闭blocking包被后固相

应用EXCEL绘制ELISA标准曲线及计算样本浓度整体思路：在ELISA实验结束后我们得到的是经酶标仪读出的标准品以及样本的OD值其中标准品的浓度已知我们可以利用标准品的OD值及其相对应的浓度以OD值为横坐标浓度为纵坐标做一条标准曲线并用公式表示出来这样我们把样本的OD值以X值代入便可求出Y值即样本浓度下面我们就一步步来实现这个目标:1. 首先将数据整理好输入Excel分别为经酶标仪读出标准