非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)一实验目的1了解非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和优势2掌握如何活性电泳和染色的步骤二实验原理 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)或称为活性电泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于酶的鉴定同工酶分析和提纯未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其

(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度分子量测定略欠精确影响蛋白质与膜的结合力.购买信息:中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:(14.

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质电泳与操作福建中医药大学康复医学研究所林炜 博士2012.4.13Questions：什么是氨基酸氨基酸有何结构特点什么是肽肽是如何形成的形成肽的化学键是什么什么是蛋白质蛋白质的结构特点是什么蛋白质特性 氨基酸(amino acid)含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物是蛋白质的基本组成单位 氨基酸的酸碱性质

蛋白质电泳一实验原理1.简述醋酸纤维薄膜电泳分离人血清蛋白基本原理2.如果样品液中含有三种蛋白质ABC它们的等电点和分子量分别是MrA：36KDpIA：MrB：60KDpIB：MrC：28KDpIC：在静电场80V条件下经过40min钟电泳染色脱色后从阳极到阴极的排列顺序如何是现代生物科学研究中主要用来分离分析蛋白质酶等生物大分子的核心技术之一该技术分辨率较高的主要因素有哪几种简要说明技术方

几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集最常用的就是SDS－PAGE电泳技术关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠)SDS会与变性的多肽并使蛋白带负电荷由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成

SDS-PAGE分离胶(即下层胶)：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围6胶50-150kD8胶30-90kD10胶20-80kD12胶12-60kD15胶10-40kD成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)8胶51015203050蒸馏水2.34.66.99.313.923.230Acr-Bis(29:1)1.32.74.05.38.013.31M TrispH8

SDS-PAGE电泳操作步骤：试剂配制：(实验中采用均为分析纯)(1)丙烯酰胺贮液 (4℃下棕色瓶中储存试剂尽量勿存储过久)丙烯酰胺贮液(T=30C=3)称取29.1 g丙烯酰胺和0.9 g甲叉双丙烯酰胺用双蒸水溶解定容至100 ml过滤备用(试剂有毒操作中注意防护)(2)浓缩胶缓冲液(1 molL Tris-HClpH 6.8)(4℃下棕色瓶中储存试剂尽量勿存储过久)6.06 g Tri

有篇Nature的protocal我们试验室的Tricine-SDS-PAGE就是参照其做的 Tricine sds page.pdf (209.29k) Tricine-sds-page 一.试剂及缓冲液AB-3 浓缩胶 : 9.6g丙烯酰胺 0.3g甲叉双丙烯酰胺 溶于20ml水.(49.5T3Cmixture)AB-6 分离胶 : 9.3g丙烯酰胺 0.6g甲叉双丙烯酰胺 溶于20ml