盖新那 博士论文方法：包涵体洗涤液I50 mmolL Tris-HCl(pH8.0)100 mmolL NaCl10 mmolL EDTA(pH8.0)0.5 (vv) TritonX-100包涵体洗涤液II包涵体洗涤液I2 molL尿素包涵体洗涤液III(pH9.0)包涵体洗涤液I4 molL尿素包涵体溶解液50 mmolL Tris-HCl(pH9.010.0)100 mmolL NaC

第二部分：蛋白的纯化如何区分蛋白表达在上清还是包涵体破碎细胞后离心分别收集上清和沉淀表达的蛋白可能分布在上清中也有可能分布在沉淀中还有可能是二者中都有分布根据我们实验室的经验超声碎菌之后如果菌液比较清亮沉淀比较少那表达的蛋白基本上是可溶的但如果超声完之后 菌液是浑浊的而且当离心之后离下的沉淀比较多而且沉淀的颜色也比较白那基本上就是包涵体了包涵体是基因重组蛋白在大肠杆菌中高水平表达时所形成 的

原核表达步骤 原核表达先要将基因克隆到原核表达载体上然后通过转化到JM109或BL21等菌株中诱导表达蛋白然后进行蛋白纯化本实验方案的前提是目的基因已克隆到载体并已转进入JM109菌株中鉴定目的蛋白是否在大肠杆菌JM109或BL21中大量表达制样1 . 挑取经过双酶切鉴定的单克隆菌落于700ul LB培养基加入0.7ul Amp(