将大肠杆菌DH5α贮存菌液在无抗的LB平板划线37℃过夜培养从37°C过夜(16-20 hours)培养平皿内挑取单菌落把这样的单菌落接种于一只装有5毫升LB 的30毫升灭菌试管中于37°C下振荡培养过夜按1(vv)接入新鲜的LB液体培养基取2ml接种于200mlLB培养基中37°C下200rpm振荡培养2到2.5小时OD600为0.3-0.5左右(此时细菌处于对数生长期)将菌液加入事先预冷

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