PCR室作业指导书 文件编号：ABCD-3-PR-0131第A版编制： 审核： 批准： 生效日期：2006年8月8日ABCD人民医院检验科Created with an evaluation copy of Aspose.Words. To discover the full versions of our APIs please visit: :pro

1)RNA 提取采用试剂 Trizol Reagent (购自 invitrogen )2)氯仿异丙醇70 乙醇0.1 DEPCDEPC 处理的超纯水 (2) 聚合酶链式反应(PCR)核酸电泳试剂1) Tris-硼酸储存(5×TBE)缓冲液：54g Tris 碱27.5 g 硼酸20 ml 0.5 molL EDTA(pH8.0)溶于 1000 ml 水2) 溴化乙啶(10 mgml

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Polymerase Chain Reaction (PCR)技术及其应用应用分子生物学专题二PCR技术及其应用(二)PCR技术的拓展PCR及其相关技术的发展速度是惊人的国际上分别于1988年和1990年在美国和 英国召开了第一届和第二届PCR技术专题研讨会第一届会议主要讨论了PCR的应用与技术本身的优化问题第二届会议的主要议

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实时荧光定量PCR(Real time Quantitative PCR)定义 在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 普通PCR与Real-time PCR的区别普通PCRR

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式定量PCR技术及其应用西安天隆科技有限PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链反应技术是一种模拟天然DNA复制过程由引物介导耐热DNA聚合酶反复催化通

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级荧光定量PCR技术讲座------分子生物学实验技术系列讲座Ⅲ张志坤 20100910大纲一荧光定量PCR技术的基础理论二引物及Taqman探针的设计三内参基因的选择四反应体系的优化五实验方案的选择六误差分析及操作规范七实验中污染的防控八实验结果的分析一荧光定量PCR技术的基础理论1荧光定量PCR技术概论 荧光定

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR常见问题原因分析及其对策主讲人：欧阳志荃PCR技术简介PCR常见问题原因分析及其解决方案提高PCR反应特异性的策略主讲内容PCR技术简介PCR标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶反应体系对PCR扩增的影响DNA模板纯度 蛋白多糖酚类等杂质会抑制PCR反应完整性 模板降

什么是引物二聚体怎样消除引物二聚体是引物的3端间相互错配扩增形成的引物二聚体的出现是必然的只是或多或少的问题电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现只是含量低我们 的肉眼看不到而已提高PCR严谨性(包括提高退火温度降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度减少PCR产物中引物二聚体的方法:1从引物自身 着手重新设计引物这是最根本解决这一问题的办法2.可能模板有问题模板浓度过小适当加大模板量

一PCR 实验室设置的一般要求:工作区域划分见图示缓冲间设为负压顶上可装一紫外灯缓冲间通向实验室的门和走廊的门安装磁性连锁装置当一门打开时另一门处于关闭状态四个工作区应有固定于房顶的紫外灯各区的仪器设备工作服鞋实验记录本和笔不得混淆二各区具体要求：试剂准备区仪器：加样器天平离心机等(需专用并定期校准)缺：低温冰箱空调紫外灯振荡器试剂：所需试剂盒75乙醇DEPC处理水等(化学试剂应使用分子生物

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR技术§1 PCR技术原理§2 PCR技术应用一PCR技术简史DNA的复制聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解链酶DNA解旋解链合成引物子链延长PCR技术简史DNA的复制聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAG

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作流程利用PCR技术扩增目的基因原理:DNA双链复制前提:要有一段已知目的基因的脱氧核苷酸序列以便合成引物获取目的基因从生物体中直接获取利用化学方法人工合成构建表达载体表达载体的组成目的基因启动子终止子标记基因将目的

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断课题21多聚酶链式反应的概念一 课题背景2多聚酶链式反应的应用： 的诊断 和DNA 等各方面遗传疾病刑侦破案古生物学基因克隆序列测定1DNA分子的组成成分和结构DNA 分子的基本组成单位是 .共

PCR的主要影响因素及常见问题解决方法第一部分PCR的主要影响因素PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA然后才进行自动热循环最后进行产物鉴定与分析引物设计与合成目前只 能在少数技术力量较强的研究院所进行临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作PCR自动热循环中影响因素很多对不 同的DNA样品PCR反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致现将几种主要影响因素介绍如下 一温度

实时荧光定量PCR原理　　所谓实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 1. Ct 值的定义　　在HYPERLINK :baike.baiduview893953.htm荧光定量PCR技术中有一个很重要的概念 -- Ct值C代表Cyclet代表thresholdCt值的含义

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级核酸血液筛查05 April 2022P1分子生物学概论一核酸血液筛查相关技术二三 目 录P2核酸血液筛查系统05 April 2022四血站核酸检测样本的采集运送和保存三PCR实验室的污染防治 分子生物学概论P305 April 2022 核酸的分子组成-核苷酸

Primer-BLAST是NCBI的引物设计和特异性检验工具Primer-Blast介绍Primer-BLAST在线设计用于聚合酶链反应(PCR)的特异性寡核苷酸引物Primer-BLAST可以直接从Blast主页( HYPERLINK :blast.ncbi.nlm.nih.gov :blast.ncbi.nlm.nih.gov)找到或是直接用下面的链接进入： HY

PCR 技术的种类及其应用 1 PCR 技术的基本原理PCR 技术是在模板DNA引物和四种dNTP等存在的条件下 依赖于DNA聚合酶(T aq 酶)的酶促合成反应其具体反应分三步：变性退火聚合以上三步为一个循环 每一循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板数小时后介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的复制经2530次循环DNA数量可达2×1067拷贝数2　PCR技术的种类2.1 反向PCR

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR引物设计及相关软件使用主要内容背景PCR引物设计原则常用PCR引物设计软件Primer Premier 5.0 介绍Oligo 6.22 介绍在线Primer3 介绍PCR聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术它具有特异敏感产率高快速简便重复性好

普通PCR原位PCR反向PCR和反转录PCR的基本原理和操作步骤基础兽医系 陈洪博 S2008467普通PCR1概述聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称 HYPERLINK :baike.baiduview2764.htm t _blank PCR是一种 HYPERLINK :baike.baiduview246

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实时荧光定量PCR仪及在国内应用现状生物医学信息工程教育部重点实验室 彭年才 张镇西 蒋大宗西 安 天 隆 科 技 有 限 公 司 李 明 李红东一. 关于PCR什么是PCR 我不认为PCR能够用两种革命(政治革命和科学革命)加以说明……它的发明并没有改变基因操作的本质有了PCR我们能在更