DNA的酶切实验采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接酶切可以是单酶切也可以是双酶切单酶切操作比较简单但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同这时可以采用如下措施解决:1)先用一种酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切2)先进行低盐要求的酶酶切然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求加入第二种酶进行酶切3)使用通用缓冲
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA二分非对称5-7 bp 非对称实验材料和试剂反应 10×缓冲液2μL限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶消化1-2h但要完全酶解则必须增加酶的用量一般增加2-3倍甚至更多反应时间也要适当延长 酶切时所加的DNA溶液体积不能太大否则DNA溶液中其他成分会干扰酶反应 许多实验制备的D
AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点
AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点 As
限制性内切酶酶切位点汇 : : AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点
限制性内切酶酶切位点汇AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别
连接互相匹配的粘性末端,产生新的酶切位点通常连接互相匹配的粘性末端可以产生新的酶切位点。以下组合是通过计算机程序计算出来的,尽管我们希望能尽量保证其准确性,但有些未经实验证实,因此不能保证100%的可行性。如果有同裂酶存在,则只列出其中的一个酶。本表中列出的内切酶均为已商品化的内切酶。识别序列不够严谨的内切酶(例如,识别多个序列的酶)只在括号内标出相关的序列,但注意这些酶不只切割该序列。-表示
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级质粒DNA的酶切鉴定 限制性内切酶是DNA操作过程中所使用的基本工具其特异性地结合于一段特殊DNA序列之内或其附近的特异位点上并在此切割双链DNA分子克隆中常用的为II类限制酶其识别位点长度为45或6个核苷酸的反向重复序列限制酶的切割点因酶而异有些产生带平端的DNA片段而另一些产生带有粘性末端的DNA实验原理限制性内切酶切
实验三 DNA限制性内切酶 消化酶切实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA限制性内切酶酶分子识别位点切割位点 限制作用是否需用 ATPⅠ类 三亚基双功能酶 二分非对称至少在识别位点外 1000bpYesⅡ类内切酶与甲基化酶分子不在一起4-6bp 大多数为回文对称结构 在识
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