万方数据
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质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
粘性末端是交错切割结果形成两条单链末端这种末端的核苷酸顺序是互补的可形成氢键所以称为粘性末端如EcoRI的识别顺序为: 5…… GAATT_C ……3 3…… C_TTAAG …… 5垂直线表示中心对称轴从两侧读核苷酸顺序都是GAATTC或CTTAAG这就是回文顺序(palindrome)_和表示在双链上交错切割的位置切割后生成5……G和AATTC……33……CTTAA和G……5二个DNA片段各有
1. 实验目的 学习和掌握限制性内切酶的特性掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具 如Xba1和Nhe1: 5…TCTAGA…3 5…GCTAGC…3 3…AGATCT…5 3…CGATCG…5 5…T CTAGA…3 5…G CTAGC…3 3…AGATC T…5 3…CGATC G…
第25卷第6期
Click 注意 1)限制性核酸内切酶的类型及特性按限制酶的组成与修饰酶活性关系以及切断核酸的情况不同分为三类: Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型EcoR I 酶切位点:GAATTCHind Ⅲ 酶切位点: 未酶切质粒2. EcoRI 单酶切3. EcoR1Hind Ⅲ双酶切M. DNA Marker.
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR 质粒DNA酶切后电泳鉴定目的要求掌握PCR的原理和操作步骤熟悉限制性核酸内切酶掌握DNA琼脂糖凝胶电泳操作方法实验原理PCR原理反应体系:模板dNTP引物DNA聚合酶Mg2反应条件:变性退火延伸限制性内切酶一类能够识别和切割DNA分子中特定碱基序列的核酸水解酶限制性酶切位点:能够被限制性内切酶特异识别结合并切断的一段
2. 限制性核酸内切酶的命名法二琼脂糖凝胶电泳实验原理内切酶活性下降内切酶稀释不正确DNA不纯反应条件不佳内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其它修饰部分DNA溶液粘在管壁上内切酶溶液粘度大取样不准酶切后DNA粘末端退火由于反应溶液温度强烈振荡使内切酶变性过度稀释使酶活性降低反应条件不适识别位点两侧插入了可影响酶切效率的核酸顺序检查反应条件:甘油浓度大于12盐度过低Mn2的存在及酶:DN
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