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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 cDNA文库的构建和筛选以mRNA为模板反转录出的DNA称cDNA1. cDNAmRNAcDNA3 3 5 5 反转录酶引物2. cDNA library利用某种生物的总mRNA合成cDNA再将这些cDNA与载体连接转入细菌细胞中进行保存和扩增称cDNA文库 cDNA文库的特点1. 基因特异性 来自结构基因仅
遗!传!#$%&’(!
cDNA文库的构建分为六个阶段:阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链阶段2:cDNA第二链的合成阶段3:cDNA的甲基化阶段4:接头或衔接子的连接阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接[阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链]1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成:poly(A) RNA (1μg/μl) 1
Event Librar
cDNA文库的扩增 为了长期多次筛选cDNA文库需要适时将所构建的cDNA文库扩增和适当保存 小心扩增文库以保证扩增后的文库是原库的真实复制所有的λ噬菌体库均需在固体介质中扩增在液体培基中可能会导致克隆的非等量生长 一构建在λgt10中的cDNA文库的扩增 用λgt10噬菌体感染hfLA大肠杆菌时带有活性的cI基因噬菌体生长受到抑制噬菌斑的形成亦被抑制相反cI基因失活
An Improved Metho
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作物学报ACTAAGRONOM
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