单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第二章 基因工程载体2012.09主要内容第一节 载体概述(重点)第二节 质粒载体(重点)第三节 噬菌体载体(重点)第四节 粘粒载体(理解)第五节 人工染色体载体(重点)第一节 载体概述(重点)基因载体定义为携带目的基因实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子常用载体质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA粘粒DN
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第三章 基因克隆载体(质粒载体)Review载体应具备的条件(P38) 1. 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)2. 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3. 具有多种单一的酶切位点(多克隆位点)4. 具有合适的选择性标记 自我复制表达外源基因的插入不影响其功能的发挥易于从宿主细胞分离出来5. 分子量尽可能小
功能大肠杆菌的质粒(酵母的杀伤质粒是RNA编码毒性糖蛋白)③ 线形DNA ( linear lDNA)L结合EB多加溶菌酶裂解细菌细胞壁 过Dowex AG50W-X8柱子用数倍体积的 NaCL清洗去除EB大肠杆菌接合(conjunction)磺胺大肠杆菌素对不带Col质粒的大肠杆菌有毒A. 严紧型质粒(stringent plasmid)亲缘关系密切的质粒一般属于不亲和性质粒如野生型质粒与其衍生
第三章 基因工程的载体按载体性质分转基因植物体系第一节 质粒载体102023412λ噬菌体为线性双链DNA的细菌病毒具有互补的12bp粘性末端感染细菌后粘端互补成双链环状全长48531bp含50多个基因四λ载体的克隆原理和步骤1通过裂解过程增殖λ载体2载体与外源DNA的酶切载体一般要纯化左路右臂并进行去磷酸化处理3外源DNA与载体的连接形成的是多联体4重组噬菌体的体外包装需要单独制备衣壳蛋白包
第二章 基因工程的载体和工具酶第一节 载体引 言基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达而目的基因本身无法进行复制和表达不易进入受体细胞不能稳定维持所以就必须借助于载体及其寄主细胞来实现作为基因克隆的载体必须具备以下特性:⑴载体必须是复制子⑵具有合适的筛选标记便于重组子的筛选⑶具备多克隆位点(MCS)便于外源基因插入⑷自身分子量较小拷贝数高⑸在宿主细胞内稳定性高一质粒载体(
pBR322的一些有用特性第三个优点是pUC8拥有多克隆单酶切位点这使有两个不同黏性末端的DNA片段(比如一端是被EcoRI酶切过的另一端是被BamHI酶切过的)可以直接被克隆而不需求助于加入连接片段的操作其他的pUC载体拥有不同的限制性酶切位点具有更大的灵活性允许更多种不同的DNA片段被克隆此外这些载体中的限制性酶切位点与存在于M13mp 系列载体中的限制性酶切位点一样可以很方便的进行DNA测序
生物制药工艺学 基因工程
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程 第五章噬菌体和粘粒载体单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程 第四章 基因工程质粒载体单击此处编辑母版标题样式西北师范大学 精品课程 武国凡基因工程单击此处编辑母版标题样式第五
外源DNA和质粒载体的连接反应外源DNA片段和线状质粒载体的连接也就是在双链DNA5磷酸和相邻的3羟基之间 形成的新的共价链如质粒载体的两条链都带5磷酸可生成4个新的磷酸二酯链但如果质粒DNA已去磷酸化则吸能形成2个新的磷酸二酯链在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口当杂本导入感受态细胞后可被修复相邻的5磷酸和3羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同的DNA连接酶催化这两种酶就是大肠杆
一)黏性末端DNA分子间的连接 在DNA片段上某一酶切口处换成另一种酶切口5 P-3 5突出的末端 外源片段先用Klenow补平然后用TdT补加polyC载体片段也用Klenow补平加polyG退火不经连接即可转化目的是:不使酶切位点遭受破坏 ployG退火用化学合成法合成的一段10-12bp的特定限制性内切酶识别位点序列的平端双链1978年康内尔大学的吴瑞教授发明Blunt-en
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