植物蛋白的提取1 取冻存的植物材料2 g,加入液氮研磨成粉末;2 加入适量(材料:提取液=1:15)蛋白提取缓冲液,冰上孵育30 min;蛋白提取缓冲液:试剂用量Tris-MES(05M, pH = 80)10 mLEDTA(05M, pH = 80)2 mLSucrose17115 gMgCl2(1 M)01 mLDTT(1 M)05 mLddH2O补至
人血浆转铁蛋白的提取a.取100ml人血浆冰水浴下加入 碳酸氢钠溶液滴加 NTA溶液和 FeCl3溶液的混合液搅拌34小时b.量得烧杯中液体体积为 X ml称取()g(NH4)2SO4研细20min内加入烧杯中冰水浴1小时离心(10000rpm10min)得Yml上清液c.称取()g(NH4)2SO4研细20min内加入烧杯中冰水浴小时4℃冰箱中过夜d.将过夜的液体离心(10000r
38 Protein ExtractionTotal proteins from different samples (03 g) were extracted in 1 mL cold TPBS buffer (150 mM NaCl, 8 mM Na2HPO4·12H2O, 2 mM KH2PO4·H2O, 4 mM KCl, 005% Tween-20, and 2% SDS, pH 7
提取细胞蛋白吸出瓶内液体使用刮刀刮掉培养瓶上吸附的细胞 PBS清洗一次转移至EP管中 离心3000rpm 6min(上层:厌氧液 下层:细胞)弃上清 加入裂解液(裂解液:1:100蛋白酶抑制剂PMSF)冰上 30min每5min震荡一次离心 12000rpm 10min(上层:细胞成分 下层:细胞骨架(弃))取上清加入buffer 煮10min保存 : : :
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式一种是在强启动子条件下的高效表达由于蛋白的过度表达使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲以固体颗粒的形式堆积于胞间质中这就是所说的包涵体另外一种是间质内的可溶性表达即可以发生正常折叠具有生物活性一般情况下细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开 超声破碎的条件一般是300w10s10s20分钟具体条件可根据自身情况而定 超
菠萝蛋白酶提取实验目的:1.了解菠萝蛋白酶的基本性质设计提取方法并测性其蛋白总量及酶活性2.计算从菠萝中提取菠萝蛋白酶时每步的回收率判断提取方法的优劣二.实验原理:菠萝蛋白酶外观为白色至浅棕黄色无定形粉末可溶于水水溶液无色至淡黄色有时有乳白光不溶于乙醇氯仿和乙醚属糖蛋白主要作用原理是使多肽类水解为低分子量的肽类尚有水解酰胺基键和酯类的作用其作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化啤酒澄清还用于干酪明胶及水
#
原核蛋白的提取构建的原核表达载体转化BL-21或者Rosetta表达菌株,用保存的菌液或者单克隆接在相应抗性的LB培养基中,37℃过夜培养将小摇的菌株接在250ml LB中,使OD达到01,加入对应抗生素。28℃摇菌,约2到3个小时后,待OD达到06时,用IPTG(02mM到2mM)诱导蛋白表达。同时加入40%葡萄糖溶液2~5ml,放入30/28/18℃摇床生长注意,接大摇时,LB体积应小于四
#
2. 实验试剂表1 分离胶工作液的配制171 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
违法有害信息,请在下方选择原因提交举报