マスタ タイトルの書式設定マスタ テキストの書式設定第 2 レベル第 3 レベル第 4 レベル第 5 レベル单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 PCR(Polymerase Chain Reaction)技术即聚合酶链反应又称DNA体外扩增技术 1985年由美国PE-Cetus的Mullis等人发明的一种具有划时代意义的分子生物学技术被誉
单击此处编辑标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR技术及其应用分子生物学与临床 中 山 大 学 主讲:杨 中 汉(yangzhonghan163)目 录PCR的概念 PCR技术的创建PCR的原理PCR的反应体系和方法PCR的类型和应用 多聚酶链式反应(PCR:Polymerase Chain Reaction)Polymerase: D
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PCR1PCRPCR1PCR 在微量离心管中加入适量的缓冲液 微量的模板DNA四种脱氧单核苷酸DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以dNTP为反应原料靶序列为模板按碱基配对与半保留复制原理通过高温变性低温退火和中温延伸三个阶段合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链而且这种新链又可成为下次循环的模板每一次循环使特异段的基因拷贝数放大一倍一般样品是经过30次循环最终使基
提要第二次循环三. PCR反应体系2.PCR仪工作参数的设置94℃ 3060sec55℃3060sec72℃3060sec循环30次最后72℃延伸5min3.PCR产物的保存与检测PCR产物于4℃保存PCR产物检测 1005-100 ×105 第一次 PCR(四)重组PCR(rbinant PCR)设计两对引物a和bc和d引物bc 5′端有部分碱基互补并将突变碱基插入片段缺失片段或不相邻的
实时荧光定量PCR (fluorescent quantitative PCRFQ-PCR)常规PCR方法的局限性分析:非特异性的嵌入荧光染料评价 一般而言荧光扩增曲线扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段 荧光信号指数扩增阶段和平台期在荧光背景信号阶段扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖我们无法判断产物量的变化而在平台期扩增产物已不再呈指数级的增加 PCR 的终产物量与起始
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25荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCRFluorescence quantitative PCR)12结核分枝杆菌(TB) FQ-PCR检测与常规检测比较荧光定量PCR检测淋球菌丙型肝炎病毒的PCR检测 巨细胞病毒(CMV)为疱疹病毒科成员其基因组由一240kb的线性双股DNA分子组成人类巨细胞病毒对人的感染很普遍有时感染是致死性的这种病毒也是引起人类先天性畸形的一个重要原因所以建立快速敏感的诊断
マスタ タイトルの書式設定线性图谱 线性期 RCT= RB X0(1 e)CT Rs lg (RCT -RB) = lg X0 CT lg (1 e) lg Rs CT lg (1 e) = - lg X0 lg (RCT -RB) –lgRs S log( 即 CT = - k lg X0 b(线性方程) CT = - k lgX0 b R Q 5 绝对定量 Cts
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