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DNA聚合酶和DNA连接酶的比较比较项目DNA聚合酶DNA连接酶??不?同?点形成磷酸二酯键的方式只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3末端的羟基上形成磷酸二酯键是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键不是在单个脱氧核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键是否需要模板以一条DNA链为模板将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来因DNA连接酶不
DNA聚合酶和DNA连接酶的比较比较项目DNA聚合酶DNA连接酶??不?同?点形成磷酸二酯键的方式只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3末端的羟基上形成磷酸二酯键是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键不是在单个脱氧核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键是否需要模板以一条DNA链为模板将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来因DNA连接酶不需要模
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第27卷第6期
7 / NUMS7 PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接)【实验原理】片段回收方法:DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中,通上一定电压进行电泳,不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。切下带有所需DNA片段的凝胶,用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。2利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3’T突出端的载体,在连接酶
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双酶切连接反应的经验1 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近必须注意酶切顺序因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割有的酶要求识别序列两端有多个碱基的则必须先切否则就可能造成酶切失败2 回收PCR产物:回收的PCR产物片段=1:10 一般取前者后者取pmol为单位的DNA转换为为g单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650) 1000000 (注:
DNA的亚克隆综合实验方案班级:生物科学1班 :魏小笛 :108012011087一实验学时:3?二实验类型:综合性实验?三实验要求:必修?四实验目的对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆其目的在于对目的DNA进行进一步分析或者进行重组改造等五实验内容(1)目的DNA片段和载体的制备(2)目的DNA片段和载体的连接(3)连接产物的转化(4)重组子筛选六实验过程一目的DN
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