1. 实验进行前无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌以70 ethanol 擦拭无菌操作抬面并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后才开始实验操作每次操作只处理一株细胞株且即使培养基相同亦不共享培养基以避免失误混淆或细胞间污染实验完毕后将实验物品带出工作台以70 ethanol 擦拭无菌操作抬面操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后再进行下一个细胞株之
第四节 细胞培养与细胞杂交一 植物细胞培养外植体培养:诱发产生愈伤组织用于研究植物的生长发育分化和变异进行无性繁殖制取代谢产物悬浮细胞培养:适合于进行产业化大规模细胞培养制取植物代谢产物原生质体培养:培养脱壁后的细胞特点:①比较容易摄取外来的遗传物质如DNA②便于进行细胞融合形成杂交细胞③适宜条件下可产生细胞壁经诱导分化成完整植株单倍体培养:通过花药或花粉培养可获得单倍体植株Plant Cell
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级细 胞 培 养 池文杰一细胞培养的基本知识(一)培养细胞的特性1.培养细胞的生长方式贴附生长: 必须贴附于支持物表面才能生长见于各种实体瘤细胞悬浮生长:于悬浮状态下即可生长不需要贴附于支持物表面见于各种造血系统肿瘤细胞 2. 培养细胞的生长特点: a.贴附 贴附
材料: MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004) 6-well TC plate (or 35 mm TC dish) methanol glacial acetic acid 10 Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013) 步骤: 1. 以待测试培养基培养MDCK cell接种MDCK 细胞于6-well plate (或35mm
实验三 细胞培养技术与PCR一、实验目的:1、了解细胞原代培养、传代培养、细胞冻存和细胞复苏过程;2、掌握PCR的基本过程及原理。二、实验内容:1、细胞培养;2、PCR。三、实验过程:观看细胞培养技术视频和PCR技术视频,并回答一下问题:1、原代细胞培养和传代培养有何不同?2、超净工作台无菌操作注意事项(“三禁止”)。3、细胞培养间内一般用哪种显微镜观察培养的活细胞?4、PCR的基本过程?5、PC
Remove all medium Adjust the cells concentration of 106107mlWashing cells Cell counting Load hemacytometerSubculture cells Upon confluency NoteUsing room temperature Ficoll-Hypaque solution underlay
第四节 细胞培养技术一体外细胞培养技术 细胞培养(cell culture):是指从活体中取出小块组织分离出细胞在一定条件下进行培养使之能继续生存生长增殖的一种方法 优点:离体条件下观察细胞生命活动规律不受体内环境影响可人为改变条件进一步观察生理功能的改变 IN VITRO:(离体的即在玻璃容器中)用培养细 胞进行的实验IN VIVO:(在体内的)完整机体内进
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Caco-2细胞的培养技术费方利2007-12-30一细胞实验的准备工作培养基的配置DMEM培养基用滤器过滤后灭菌PBS的配置配10×的贮存液用时稀释120℃灭菌细胞冻存液的配置血清:DMSO=9:1二无菌操作70酒精擦拭超净台实验用品擦拭后放入超净台紫外灭菌30min擦拭双手点酒精灯小心取用无菌实验用品切勿碰触吸管与吸头头部
概念:培养的细胞由于细胞增殖数量增加细胞难以继续生长繁殖需要进行分瓶培养将培养的细胞分散以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养即为传代培养也叫做继代培养一般细胞可传代10-50代所谓细胞一代即从细胞接种到分离再培养的一段时间如某一细胞系为50代即该细胞已传代50次4加入12滴管含有血清的培养液反复吹打细胞使其成细胞悬液5以1:2或1:3进行分装补充新鲜培养基并在培养瓶上做好标记注明代
常用设备 准备室的设备: 单蒸馏水蒸馏器双蒸馏水蒸馏器酸缸烤箱高压锅储品柜(放置未消毒物品)储品规(放置消毒过的物品)包装台配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)PH计(测量培养用液PH值)磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)培养室的设备:液氮罐储品柜(存放杂物)日光灯和紫外灯空气净化器系统低温冰箱(-80℃)空调二氧化碳缸瓶边台(书写实验记录)必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)超净
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