细胞免疫荧光技术实验目的掌握免疫荧光技术的基本原理熟悉细胞免疫荧光技术的方法了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果实验原理原位检测抗原抗体特异反应间接法 间接荧光抗体染色法示意图Hela细胞Vinculin实验用品试剂:固定液:4%PFA细胞通透:02%TritonX封闭试剂:10%正常山羊血清一抗:小鼠源抗Vinculin单克隆抗体二抗:Alexa Fluor555标记的山羊抗小鼠IgGD
第四军医大学基础部病理学教研室免疫荧光细胞化学技术 免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一是由Coons等(1950)建立免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学 它与葡萄球菌A蛋白(SPA)生物素与卵白素植物血凝素 (ConA等)相结合拓宽了领域与激光技术电子计算机 扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光细胞化学技术荧光激活细胞分类器 (FA
第四章免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术(immunofluorescencecytochemistry) 采用荧光素标记的已知抗体或抗原作为探针,检测待测细胞或组织内的靶抗原或抗体,形成带有荧光素的抗原抗体复合物。利用荧光显微镜观察标本,根据组织细胞中荧光物质的存在,确定抗原或抗体的性质并定位,以及利用定量技术测定含量。荧光抗体法:用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法。 较常用荧光抗原法:用
威斯腾生物技术中心免疫共沉淀技术定义及原理操作流程优点和不足注意事项应用及实例展望定义及原理免疫共沉淀定义 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)也称免疫共吸附或免疫下拉技术,能够从细胞裂解物中特异性的分离并富集目标蛋白。CO-IP是通过抗原抗体之间的专一性作用为基础来研究蛋白质相互作用的经典方法。也是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。基本原理 在
免疫胶体金技术Immune colloidal gold technique胶体金标记技术的相关定义免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。胶体金标记实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。胶体金技术的发展Development of Immune colloidal gold technique 1939-----雏形Kausche等把烟
方法一:首先需要把细胞养在玻璃片上(悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片)然后在4PFA里面室温下固定30分钟PBS洗两次0.1 TX-100室温下作用1-2分钟使细胞膜通透接下来进行荧光标记需要在一个大的容器(面积大扁平状的比如大的培养皿)里面放一张用水打湿的滤纸以保持湿度剪一片合适大小的parafilm在上面滴上稀释在1BSATBS中的一抗(稀释倍数依具体抗体而定)每个玻璃片30ul足
免疫标记技术 用可以微量检测的标记物(示踪物质)标记抗原或抗体,作为试剂,与相应抗体或抗原结合反应后,测定抗原抗体复合物中的标记物,从而推断所测抗体或抗原有无及量的多少。免疫标记技术 =免疫技术+ 标记技术酶荧光素同位素常 用 标 记 物荧光素酶同位素胶体金可发光化学物质试验命名: 根据标记物命名 如:免疫荧光技术 免疫酶技术等第七章 荧光免疫技术( fluoroimmunoassay )(P61
细胞免疫荧光实验步骤细胞免疫荧光实验步骤 简单实验步骤如下:1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后自然干燥 10分钟3.PBS洗净:3min34.1Triton:25min-30min.配成50ultriton5mlpBS5.PBS洗净:25min6.羊血清封闭:37度20分钟7.一抗4度过夜一般要大于18小时或者37度 1-2小时8.4度
免疫学实验2-----免疫荧光技术 实验目的 初步掌握免疫荧光技术的原理一般操作步骤及结果的观察方法Principle : antigen antibodyTwo necessary conditions: specificity visibilityAg-A
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级荧光免疫层析技术的原理与进展介绍人:罗敏 荧光免疫层析技术的基本原理层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力分子形状和大小分子极性分子亲和力分配系数等)而建立来的一种分离技术层析系统是由固定相(stat
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