对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种获取基因序列多从文献中查取即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据 目前世界上主要的基因库有: (1)EMBL为设在欧洲分子生物学实验室的基因库 其网上地址为: (2)Genbank为设在美国国家卫生研究院(NIH)的基因库 其网上地址为: (3)Swissport和TREMBLSwissport是一蛋白质序
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专题:基因克隆与亚克隆Transformation selection(introduce the plasmids into host cells)Plasmid pSC101A simple example of DNA CloningPlasmid preparation (vector)Gel analysis and fragment orientation
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重组质粒的连接转化及筛选第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单质粒要比其它任何载体都要好在质粒载体上进行克隆从原理上说是很简单的先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段 然后体外使两者相连接 再用所得到重组质粒转化细菌即可完成但在实际工作中 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的通过调整连接反
PCRs basic (1) the forward sequence testing of red highlighted part should have been theplete core sequencebut maybe some senior structure makes the testing abeyant.
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因的克隆与表达基因克隆(gene cloning)基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达基 因 克 隆 Gene Cloning概述克隆载体受体细胞体外重组的策略基因克隆工作流程一概述确定了遗传信息的携带者即基因的盆子载体
南方医科大学生物化学与分子生物学实验教学中心 一、 获取外源基因(PCR)二、构建重组DNA(T连接)三、重组DNA的转化四、重组DNA的筛选(蓝白斑)五、重组DNA的鉴定(酶切)实验思路PCR转化筛选鉴定T连接一、获取外源基因1碱裂解法提取质粒扩增目的基因GFP(一)仪器:恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、台式离心机、高压灭菌锅(二)材料:含pEGFP-N1质粒的大肠杆菌DH5α?(三)试剂:
基因定位(gene mapping):利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上连锁分析遗传标记1 kbNeurofibroma NF1RFLP连锁分析abcabcA – × – (BC)合核细胞TK-Human chromosome2-辐射杂种(radiation hybrid)原位杂交技术 —— 11p(70年代)年代 19921995Gln定位候选克隆已定位的疾病
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