Arabidopsis Protoplast isolation1 Prepare enzyme solution (see Note 1) 2 Heat the enzyme solution at 55?C for 10 minutes to inactivate proteases and enhance enzyme solubility3 Cool the solution to r
拟南芥原生质体的制备 (Liu et al, 2013)拟南芥原生质体分离前要求:a保持拟南芥生长条件稳定;b大约3-4周大的抽叶前苗子用于分离原生质体;c选择健康未受到胁迫的苗子;d一般用15mL酶解液酶解20片叶子每次可以做大约15个转化。①试剂配制: 母液试剂:182g Mannitol(18217g/moL)溶于ddH2O,定容至100mL得到1M Mannitol。149g KCl(
拟南芥原生质体遗传转化目的了解在拟南芥悬浮培养的细胞中瞬间表达目的基因的遗传转化方法。学习和掌握拟南芥原生质体的制备方法。原理原生质体是除去细胞壁的裸露细胞。由于消除了细胞壁的障碍,故原生质体是遗传操作、基因转化的好材料。以植物原生质体为材料进行遗传转化,可以瞬间表达外源基因,也可以获得外源基因稳定表达的转基因细胞系或转基因植株。常用的进行原生质体遗传转化的方法有电击法和PEG介导的转化法。电
亚细胞定位Fresh Arabidopsis leaves Fast temp to 4oC for the centrifugation rotorThaw the enzyme solution in ice and put the w5 solution in the 4oc freezer准备冰块于冰盒准备各种试剂 (黄色部分),需要准备的仪器等(红色部分); Freshly PEG
拟南芥原生质体的提取和转化取4周后抽薹前的叶片,切成1mm宽的长条,置于甘露醇溶液(称182g D-甘露醇于20ml双蒸水中);共需叶片约90片; 将步骤1中细条捞出,置于酶解液中;避光,23℃,40-50rpm摇床上酶解3小时; 酶解液过100-200目的筛子,收集滤液,置于15ml离心管中,均分为两管;于4℃,60g,离心15min;原生质体用冰冷W5溶液轻柔洗涤,每管4ml;4℃,100
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Analysis of Arabidopsis cutin Note: Need 1-6g of Arabidopsis tissues (stems and/or leaves)~ 100 mg dry residue per g of leaves can be obtained (starting from about 3 g of leaves)IMPORTANT: ALWAYS RI
拟南芥突变体的鉴定在TAIR中输入基因名称, 点search。?2、得到新界面之后往下拉,找到 \t _blank T-DNA Express,点击。在新界面右边一栏,找到Primers,点击。 3、在新界面下面一栏输上突变体的名称(名称的找寻在第一个界面上) 点击submit。得到T-DNA插入突变体鉴定引物设计
\* MERGEFORMAT 1 原生质体分离与转化实验药品用途药品名称货号规格单价备注质粒提取葡萄糖Tris-HClEDTANaOHSDS乙酸钾冰乙酸溶菌酶乙醇异丙醇NaClCsCl
拟南芥杂交1)选择母本:选择顶端刚刚能看见一点白色的花骨朵作为母本。2)去雄:用镊子小心去掉母本花的花萼(绿色部分),撑开花瓣,去掉雄蕊(呈微黄色)。首先,用镊子头部小心的沿着花苞的方向拨弄几下,把花苞拨松,去掉绿色的花萼;然后,用镊子把白色花瓣撑开,把微黄色的雄蕊夹掉。注意:镊子要进行消毒;不要碰到、损伤柱头。3)选择父本:选择花完全展开,呈十字状,雄蕊很黄的花作为父本。4)人工授粉:用镊子
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