DNA酶切及凝胶电泳第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子然后从底物上解离Ⅱ类由两种酶组成:
实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术DNA制备及浓度测定目的DNA片段的分离重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成根据分离的DNA大小及类型的不同DNA电泳主要分两类: (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳??适合分离1kb以下的片段最高分辨率可达1bp也用于分离寡核苷酸在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化也称PAGE纯化 (2)琼脂糖凝胶电泳??可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异胶浓度为的凝胶可以分
1掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法2学习核酸染色的方法 DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷在电场中向正极移动(电荷效应) DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关外还与DNA分子的大小和空间构象有关(琼脂糖凝胶的分子筛效应)电泳时用溴酚蓝做前沿指示剂指示DNA样品在凝胶中的确切位置溴乙啶是一种荧光染料可插入DNA双螺旋结构的两个碱基对之间与DNA分子形成络合物在紫外光的激
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR 质粒DNA酶切后电泳鉴定目的要求掌握PCR的原理和操作步骤熟悉限制性核酸内切酶掌握DNA琼脂糖凝胶电泳操作方法实验原理PCR原理反应体系:模板dNTP引物DNA聚合酶Mg2反应条件:变性退火延伸限制性内切酶一类能够识别和切割DNA分子中特定碱基序列的核酸水解酶限制性酶切位点:能够被限制性内切酶特异识别结合并切断的一段
质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验7质粒的酶切琼脂糖凝胶电泳分离DNA 实验目的 实验原理 实验仪器材料与试剂 实验步骤 实验结果及讨论 实验目的 限制性内切酶切割出目的DNA了解琼脂糖凝胶电泳的原理掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方法 实验原理 利用限制性内切酶具有特定的识别
实验: DNA的琼脂糖凝胶电泳分析实验器材和试剂 2.加样 用移液器将质粒DNA3ul与6上样缓冲液1ul混匀后加入加样孔记录点样顺序 3.电泳 接通电泳槽盒电泳仪之间的电源调电压至5vcm开始电泳 完毕按支持物的物理性状不同区带电泳可分为: 1)? 滤纸及其他纤维(如醋酸纤维玻璃纤维聚氯乙烯纤维)薄膜电泳 2)? 粉末电泳(如纤维素粉淀粉玻璃粉电泳) 3)? 凝胶
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验五DNA限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳 限制性内切酶EcoR I Restriction Enzyme识别序列: ------G↓AATT C ------ ------ C TTAA↓G ------Hind III Restriction Enzyme识别序列: ----
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