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记得当初写本科论文感到不知道讨论什么问题好愣是写了一大段的PCR条件摸索的讨论后来PCR成为实验最基本的一步了但是发现在PCR中还是有许多需要注意的地方PCR的第一步就是引物设计了引物设计需要注意的地方很多在大多数情况下我们都是在知道已知模板序列时进行PCR扩增的在某些情况比如构建文库的时候也会在不知道模板序列的情况下进行设计这个时候随机核苷酸序列就与模板不是完全匹配我们通常指的设计引物都是在已知
增加PCR特异性(一)1.引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点: 1)典型的引物18到24个核苷长引物需要足够长保证序列独特性并降低序列存在于非目的序列位点的可能性但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异
设计心得学设计第一个要认识到的就是设计不是艺术一开始要是没有分清这个概念会吃大苦的设计是沟通是传达而艺术是表现是创作这并不是说设计里没有表现的成份更不是说艺术是不在乎沟通的但是两者放在这两项上的重视是有较大差别的设计是不能凭感觉做的要考虑各种因素要寻找最准的表达方法要把自己的感觉翻译成大众能够理解的有效视觉语言 决定一个设计作品的质量的往往是它的细节例如字体的选择图形的构造颜色的差异等等这些细
机械设计心得机械设计往往离不开自己的阅历经验的积累固然可以从书本上学到不少但是事非躬亲很难在脑海中留下深刻的印象对别人的经验自己没有一定的基础要理解吸收真的是一件很不容易的事呵呵机械设计贯穿设计制造使用维护的整个过程设计时的疏忽总会在这些方面反映出来成功与否是很容易判断的设计的过程中受制造的影响很大亦就是说好的设计是不能脱离制造的对制造越了解越有助于提高设计水平设计的图纸投入生产我没见过多少
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级引 物 设 计引物引物的重要性引物设计的原则引物与PCR引物设计软件如何使用Primer Premier 5.0引物同源性分析引物(primers)引物是人工合成的两段寡核苷酸序列一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补→←3355Sense primerAnti
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR引物设计及相关软件使用PCR引物设计引物设计是PCR 技术中至关重要的一环使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败:表现为扩增出目的带之外的多条带(如形成引物二聚体带)不出带或出带很弱等等现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行可以直接提交模板序列到特定网页得到设计好的引物也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件引物设
1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的在NCBI上搜索不同物种的同一基因通过序列分析软件(比如DNAman)比对(Alignment)各基因相同的序列就是该基因的保守区 2.引物长度一般在1530碱基之间 引物长度(primer length)常用的是18-27 bp但不应大于38因为过长会导致其延伸温度大于74℃不适于Taq DNA 聚
CLONE1: 24-150CAGGGTGTTTTCGAAGACTGCTGCCTGGCTTACCACTACCCGATCGGTTGGGCTGTTCTGCGTCGTGCTTGGACCTACCGTATCCAGGAAGTTTCTGGTTCTTGCAACCTGCCGGCTGCTATCTTCTACCTGCCGAAACGTCACCGTAAAGTTTGCGGTAACCCGAAATCTCGTGAAGTTCAGCGT
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段使其能有效地扩增模板DNA序列因此引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构如这个区域单链能形成二级结构就要避开它如这一段不能形成二级结构那就可以在这一区域设计引物现在可以在这一保守区域里设计一对引物一般引物长度为1530碱基扩增片段长度为100600碱基对让我们
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