单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验三糖化酶活力的测定指导老师: 孙运军研 究 生: 赵 渊 徐 妙一目的和内容 目的:学习测定糖化酶活力的原理并掌握 测定糖化酶活力的方法内容:1. 学习糖化酶活力的原理. 2. 测定并计算糖化酶活力.二糖化酶简介以及其活性的测定原理① 糖化酶的应用及生产② 糖化酶的催化原理③ 酶活
木聚糖酶活力测定原理:木聚糖是植物半纤维素的主要成分为自然界中广泛存在含量仅次于纤维素的可再生多糖资源占细胞干重的7一35木聚糖酶是一类可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的复合酶系它以内切方式降解木聚糖主链架的β-l4-木糖苷键其水解产物主要是木二糖和木寡糖少量的木糖和阿拉伯糖木聚糖酶水解木聚糖底物生成的还原性糖可在煮沸条件下与DNS显色剂生成棕红色的氨基化合物在一定范围内还原糖的生成量与反应液的颜色强
向烧杯中的级分II 加入等体积 95乙醇搅拌冰浴10min 4度10000rpm离心15min弃去上清倒置于抽纸上沥干沉淀等量分装于两个的EP管中4℃保存做为下两次实验中的酶 (级分III)醋酸缓冲液葡萄糖标准曲线的制备 NaOH溶液℃水浴 参照蛋白质浓度标准曲线(预制)计算出各级分蛋白质含量y= X代表溶液的浓度(mgml)Y代表595nm下的吸收值
酵母中的蔗糖酶以两种形式存在于酵母细胞膜的外侧和内侧在细胞膜外细胞壁中的称之为外蔗糖酶其活力占蔗糖酶活力的大部分是含有50 糖成分的糖蛋白在细胞膜内侧细胞质中的称之为内蔗糖酶含有少量的糖两种酶的蛋白质部分均为双亚基二聚体两种形式的酶的氨基酸组成不同外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸Ser和Met它们的分子量也不同外酶约为27kDa(或22 kDa与酵母的来源有关)内酶约为两种酶底物专一性和动力学性质仍
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)实验目的及要求 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法。学会取液器及自外可见分光光度计的使用实验原理 D-葡糖糖???GOD???? D-葡萄糖酸+ H2O2 H2O2+4-AAP+苯酚POD红色醌化物+H2O实验仪器及试剂 试管 移液管 UNICO-2000型分光光度计 恒温水浴锅酶试剂:葡萄糖氧化酶(GOD)过氧化物酶(POD) 4-氨基安替吡啉(4-AAP
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一实验目的和要求:了解离子交换层析的基本原理掌握蔗糖酶的提取纯化及离子交换层析的基本步骤熟悉有关生化技术的操作方法加样洗脱:将平衡好的DEAE—Sepharose FF上端的水小心吸干留下一薄层液面用长滴管将样品液5 ml沿管壁环形慢慢加进柱内待样品液全部进入DEAE—Sepharose FF内只剩下一薄层液面时用buff环形缓慢填满层析柱立即连上梯度洗脱杯(梯度洗脱杯中靠出口处的杯中装20mmo
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase简称LDH)广泛存在于动物植物及微生物细胞内是糖代谢酵解途径的关键酶之一可催化如下反应: LDH 乳酸 NAD 丙酮酸NADHH
胞外抗氧化酶类酶活力的测定原理:在碱性条件下邻苯三酚发生自氧化反应并产生O2-在SOD存在下自氧化反应受到抑制参考邻苯三酚测活法(Marklund 法)孙 [66]按下表加入 Tris-HCl(PH 内含1mM EDTA)和ddH2O25℃恒温水浴20 min加入1 mL 待测液后加入25℃预热的邻苯三酚溶液摇匀立即于320nm测吸光值A320每 min测定一次持续测到5 min邻苯三酚自氧化法测
果胶酶活力测定原理:果胶是广泛存在于果蔬植物组织中的多糖物质果胶酶以果胶为底物可以使果胶分解并产生半乳糖醛酸3 5二硝基水杨酸(DNS)与醛糖共热能够产生棕红色氨基化合物在一定范围内还原糖量与呈色物溶液颜色成正比一定波长下测定溶液吸光值可算出半乳糖醛酸含量从而计算果胶酶酶活试剂:DNS溶液:酒石酸钾钠182 g溶于500mL蒸馏水中加热于热溶液中依次加入35-二硝基水杨酸 gNaOH 21g苯酚5
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