生物工程学报
. .安徽农业科学, Journal
表达载体构建的一般原则1、阅读框架要使目的基因得以表达,最重要的因素是外源目的基因本身必须置于正确的阅读框架之中。用人工接头可以调节阅读框架,选择适当的人工接头,就可使外源基因处于正确的阅读框架中。2、启动子(关键因素)有效的转录起始是外源基因能否在宿主细胞中高效表达的关键步骤之一。因此,选择强的启动子及其相关的调控序列,是构建一个高效表达载体首先要考虑的问题。 3、转录的有效延伸和终止 外源基因
实用医学杂志
中国实验诊断学 20
原核表达体系的构建刘华彬董浚键一实验材料(1)植物材料:拟南芥(2)载体及菌株:克隆及测序用载体为pMD18-T购自Takara宿主菌DH5α原核表达载体(pET30c )(3)PCR引物:登陆GeneBank查找目的基因序列以目的基因序列为模板设计引物(4)药品试剂:反转录试剂盒(TaKaRa)质粒小提试剂盒(TIANGEN)胶回收试剂盒Taq DNA聚合酶(TaKaRa)dNTPs(TaK
双元表达载体与共整合载体(cointegrating vector) 相对binary vector 指转化由两个载体来完成相容vir基因在实现T-DNA转移过程中没有与T-DNA在同一质粒上小Ti质粒 含T-DNA区而缺少vir区的质粒比如pBIN19 pBI121带vir区的质粒 主要功能是利用vir基因的作用激活T-DNA 的转移比如常用农杆菌菌株LBA4404其中带有这种T-DNA
克隆载体:大多是高拷贝的载体,一般是原核细菌,将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接,再导入原核细菌内,质粒会在原核细菌内大量复制,形成大量的基因克隆,被克隆的基因不一定会表达,但一定被大量复制。克隆载体只是为了保存基因片段,这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作。?????? 克隆载体(Cloning vector ):携带插入外源片段的质粒或噬菌体,从而产生更多物质或蛋白质产物。(这
siRNA表达载体的构建siRNA表达载体构建可以:(1)作为后基因组时代基因功能分析的有力工具;(2)应用于基因组学、细胞信号传导通路分析;(3)用于药物靶点筛选、疾病治疗。实验方法原理:多数的siRNA表达载体依赖三种RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种,操纵一段小的发夹RNA(short hairpinRNA, shRNA)在哺乳动物细胞中的表达。这三类启动子包括大家熟悉
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