多聚酶链式反应扩增DNA片段主讲:黄冈中学优秀生物教师 王小敏★课题目标1了解PCR技术的基本操作2理解PCR的原理3讨论PCR的应用★课题重点:PCR的原理和PCR的基本操作★课题难点:PCR的原理一基础知识(一)细胞内DNA复制条件分析条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP为解螺旋和合
新沂一中2010届第二学期高三生物一轮复习教学案017 选修一 多聚酶链式反应扩增DNA片段【学习目标】 1了解PCR技术的基本操作 2理解PCR的原理 3讨论PCR的应用【知识梳理】一PCR技术扩增DNA的过程与细胞内DNA复制过程类似:1.1细胞内DNA复制条件分析:条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打
细胞有丝分裂间期和减数第一次分裂间期B.原料:DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供了精确的模板碱基互补配对保证了复制能准确无误地进行G—A二PCR原理C—C变性3引物Ⅰ
(一)DNA分子的结构请阅读《教材》P58内容分析:基础知识 PCR就是利用了DNA的热变性原理通过控制温度来控制双链的解聚与结合 PCR一般要经历30多次循环每次循环可以分为三步:变性复性和延伸在循环之前常要进行一次预变性(目的是增加模板DNA彻底变性的概率)基础知识阅读教材P62
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断课题21多聚酶链式反应的概念一 课题背景2多聚酶链式反应的应用: 的诊断 和DNA 等各方面遗传疾病刑侦破案古生物学基因克隆序列测定1DNA分子的组成成分和结构DNA 分子的基本组成单位是 .共
课题:多聚酶链式反应扩增DNA片段教学目标:(一)知识与技能1了解PCR技术的基本操作2理解PCR的原理3讨论PCR的应用(二)过程与方法在多聚酶链式反应扩增DNA片段的实验过程中应避免外源DNA污染严格控制温度等反应条件(三)情感态度与价值观通过对PCR实验的操作及结果分析培养学生严谨的科学态度和实事求是的科研精神教学重点:PCR的原理和PCR的基本操作教学难点:PCR的原理教学过程:(一
第三节 聚合酶链反应(polymerase chain reactionPCR) PCR是模拟体内DNA复制条件应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术体外程序化的DNA合成技术1PCR2原 理:1)合成待扩增区域两端已知序列与模板DNA互补的寡核苷酸特异性引物引物的序列决定扩增片段的长度2)反应体系:DNA模板dNTPTaq DNA聚合酶buffer3)反应程序: 变
RNA的聚合酶链式反应:目前常用的RNA检测方法有原位杂交点杂交Northern印记杂交以及核酸酶保护试验等这些方法的普遍缺点是难以检测低丰度的信使RNA并且操作繁琐将RNA反转录和PCR结合起来建立RNA聚合酶链式反应(RT-PCR)则可以克服上述缺点RT-PCR先在反转录酶的作用下以信使RNA为模板合成cDNA再以CDNA为模板进行PCR反应此法快速简便并且灵敏度高此法可以检测单个细胞中
在PCR反体系中dNTP终浓度高于50mM会抑制Taq酶的活性使用低浓度dNTP可以减少在非靶位置启动和延伸时核苷酸错误掺入高浓度dNTPs易产生错误掺入而浓度太低势必降低反应物的产量PCR常用的浓度为50200μM不能低于1015μM四种dNTP的浓度应相同其中任何一种浓度偏高或偏低都会诱导聚合酶的错误掺入降低合成速度过早终止反应PCR缓冲液: 用于PCR的标准缓冲液为1050mM的Tri
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