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    一细胞冷冻保存1.材料:生长良好之培养细胞新鲜培养基DMSO(Sigma D-2650)无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)(wv)trypan blue(GibcoBRL15250-061)血球计数盘与盖玻片等速降温机(KRYO10SeriesII)2冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃1618小时(或隔夜)--->液

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    关于细胞复苏细胞冷冻保存与复苏原理 三木 转自 体外培养的原理和技术. 薛庆善 主编. 2001年2月.科学出版社 pp128-136 细胞冷冻保存与复苏原理在低于-700C的超低温条件下有机体细胞内部的生化反应极其缓慢甚至终止因此采取适当的方法将生物材料降至超低温即可使生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡当以适当的方法将冻存的生物材料恢复至常温时其内部的生化反应可恢复正常所谓冷冻保存就是将体外

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     细胞冻存和复苏实验基本原则:慢冻快融(最大限度的保存细胞活力)保护剂:甘油或二甲基亚砜作(能提高细胞膜对水的通透性)慢冻(可使细胞内的水分渗出细胞外减少细胞内冰晶的形成从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤)快复(保证细胞外结晶在很短的时间内即融化若缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤)?一细胞冻存?1. 冻存培养液?(10DMSO或甘油1020小牛血清)?

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    细胞冻存解冻方法与细胞计数一细胞冷冻保存1.材料:生长良好之培养细胞新鲜培养基DMSO(Sigma D-2650)无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)(wv)trypan blue(GibcoBRL15250-061)血球计数盘与盖玻片等速降温机(KRYO10SeriesII)2冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃

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    细胞的冻存细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。 总的原则是缓慢冻存!!!一 材料:生长良好之培养细胞 ,新鲜培养基,DMSO ,无菌塑料冷冻保存管,血球计数盘与盖玻片 。二步骤:21 冷冻前一日前更换半量或全量培养基,

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    细胞培养基及冻存液的配制细胞培养基的配制:注意事项:为了避免不小心污染造成的浪费一般用50ml管分装配制配置比例:45ml 培养基(90的总体积比例) 5ml FBS(血清10的总体积比例) 500μL 双抗(1:100的比例)双抗:链霉素青霉素——抑制细菌生长细胞冻存液的配制:配置比例:5mlDMSO(100纯度以10总体积的比例) 45ml已配好的培养基(90的总体积比例)注意事项:刚配好的细

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  • 培养传代操作规程(自编).doc

    细胞培养程序材料A仪器1. 净化工作台2. 离心机3. 恒温水浴箱4. 冰箱(4℃)5. 倒置相差显微镜6. CO2培养箱7. 振荡混合仪8. 酶联免疫检测仪9. 移液枪10. 电磁力搅拌机11. 微孔滤器B玻璃器皿1. 吸管2. 小烧杯(100ml)3. 废液缸C塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 96孔培养板4. 15ml离心管5. 50ml离心管6. 胶塞D其他物品1. 微量加样枪2. 红血球

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