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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 蛋白质的分离纯化 (一)材料 1选材 2破碎 3混合物的分离 (二)粗分级 (三)细分级 蛋白质粗分级一盐析盐析:蛋白质在高浓度中性盐溶液中会沉淀析出 常用硫酸铵进行沉淀分级沉淀:通过调节硫酸铵的浓度可以使不同的蛋 白质分阶段沉淀下来优点:价格
蛋白质分离纯化及蛋白质测定方法及评价一、 蛋白质分离纯化方法 研究蛋白质或酶的物理及化学性质,首先需进行纯化 若要研究蛋白质或酶的主体结构及酶的活性中心,催化反应机理等,则还需清除最后残留在分子中的微量其它蛋白和大分子化合物分离蛋白质及酶类要顾及最大的生产量要顾及最大的催化活性要使蛋白及酶纯度尽可能达到最高1 蛋白质分离纯化的技术路线设计及条件蛋白质的分离纯化不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质
蛋白质分子中有很多酸性和碱性解离基团是具有两性解离性质的化合物各种解离基团的解离度与溶液的pH有关pH越低碱性解离度越大蛋白质分子带正电荷越多负电荷越少pH升高则解离情况相反 二蛋白质的分子大小与分子量的测定=16700cLogM 透析:利用半透膜的选择通透性来纯化象蛋白质这样的大分子物质的过程叫透析 超过滤:是利用压力或离心力强行使水和其他小分子溶质通
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级1蛋白质的分离纯化和表征第 7 章P291一蛋白质的酸碱性质 蛋白质分子中有很多酸性和碱性解离基团是具有两性解离性质的化合物各种解离基团的解离度与溶液的pH有关pH越低碱性解离度越大蛋白质分子带正电荷越多负电荷越少pH升高则解离情况相反
蛋白质的分离与纯化蛋白质分离纯化的基本流程 选择材料和预处理 细胞的破碎及细胞器的分离 蛋白质的抽提 蛋白质的纯化 浓缩干燥和保存一材料的选择和预处理 微生物植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料所选用的材料主要依据实验目的来确定 从工业生产角度考虑注意选含量高来源丰富及成本低的原料 对动物组织必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料先除去结缔组织和脂肪组织 对预处理好的材料若不立即
酶提取酶分离纯化不同阶段机械破碎通过各种化学试剂对细胞膜的作用而使细胞破碎盐溶液提取可与水混溶的有机溶剂2离心分离分离原理选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀而不影响所需的酶从而使酶与杂质分离密度梯度离心前用密度梯度混合器预先配制密度梯度系统贮液室与混合室的截面积关系决定梯度类型配制中将稀溶液置于贮液室B浓溶液置于混合室A 如图4-2(郭勇酶工程p96) 流出的梯度液经过导管小心收集于离心
第七章 蛋白质的分离纯化和表征第一节 蛋白质的酸碱性质各个解离基团的pK 值与游离氨基酸的不完全相同等电点要用等电聚焦等方法测定第二节 蛋白质分子的大小与形状一根据化学组成测定最低相对分子质量假定某种微量成分只有一个测出其百分含量后可用比例式算出最低相对分子质量若测出两种微量成分的百分含量分别用比例式算出的最低相对分子质量不相同时可计算两个最低相对分子质量近似的最小公倍数例题:一种纯酶含亮氨
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第七章 蛋白质的分离纯化和表征第一节 蛋白质的酸碱性质各个解离基团的pK 值与游离氨基酸的不完全相同。等电点要用等电聚焦等方法测定。第二节 蛋白质分子的大小与形状一、根据化学组成测定最低相对分子质量假定某种微量成分只有一个,测出其百分含量后,可用比例式算出最低相对分子质量。若测出两种微量成分的百分含量,分别用比例式算出的最低相对分子质量不相同时,可计算两个最低相对分子质量近似的最小公倍数。例题:
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