1、前言:这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系,可以构建表达细胞系,也能构建敲降细胞系。稳转和瞬转的区别,瞬转细胞系,一般情况下能够稳定表达最多长一周左右,而稳转细胞系,只要构建成功就能稳定表达,没有时间限制,但是也不是肯定的,一般实验构建的细胞系超过 10 代以后,这个细胞系就有可能不靠谱了。2、稳转细胞系的构建:慢病毒构建载体示意图主要步骤:1 慢病毒转染前 18~24 小
慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体区别一般的 HYPERLINK t _blank 逆转录病毒载体它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力 基本概述 慢 HYPERLINK t _blank 病毒载体的研究发展得很快研究的也非常深入该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上从而达到持久性表
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细胞转染实验原理仪器试剂和操作步骤外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严难度较大病毒法的前期准备较复杂而且可能对于细
T细胞转染一、前言:原代 T 细胞的常用病毒有两种:1 逆转录病毒(mTRv 和 hRv)2 悬浮细胞专用的腺病毒(Ads)逆转录病毒感染细胞具有物种特异性,适用小鼠原代 T 细胞的为 mTRv,适用人原代 T 细胞的为 hTRv。逆转录病毒可以用来构建稳转系。专用腺病毒 Ads 不区分物种,对人、小鼠等物种的原代 T 细胞均具有很高的感染效率,另外,Ads 也非常适用感染其他悬浮细胞,如 Ju
转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响。【组织培养试剂】一般提示:优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。基础培养基目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知
转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响。【组织培养试剂】一般提示:优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。基础培养基目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知
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细胞转染注意事项:1如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/mL(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。2用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在18以上。3培养基中的血清在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使
细胞转染操作方法转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多
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