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前一阵子一直在做双酶切质粒重组失败了 很多次不过很快改善了 实验方法用2周重组了 14个质粒现就自己的体会谈一下质粒重组的一些个人经验1回收PCR产物:在进行PCR扩增时候给引物两端设计好酶切位点一般说来限制酶的 选择非常重要尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶如BamHIHindIII提前看好各的双切酶所用公用的BUFFER以及各酶在公用BUFFER里的效率选好酶切位点后在各个酶的两边
切胶回收DNA(博迈德琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒DR01)WB液使用前加入指定量的无水乙醇尽量使胶中的缓冲液减少当PH值《时吸附回收DNA效率最高正常情况小溶胶液依旧保持黄色时说明PH值正常如果变成橘红或淡紫色说明PH值偏高可在胶充分溶解时加入3M醋酸钠5-10ul实验步骤:反应液琼脂糖凝胶电泳在紫外光下切目的片段尽量减少胶的体积2.将切下的胶放入离心管中称重3.加入3倍体积的溶胶液如果胶的浓度大于
质粒DNA酶切连接转化筛选鉴定? (2011-04-29 10:42:22) javascript: ▼质粒DNA酶切连接转化筛选鉴定实验目的1学习和掌握限制性内切酶的特性2掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法3掌握利用CaCl2制备感受态细胞的方法4学习和掌握热击法转化的原理和方法5掌握α互补筛选法的原理6学习用试剂盒提取重组质粒DNA的方法7复习琼脂糖凝胶电泳的原理及方法实
双酶切连接反应的经验1 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近必须注意酶切顺序因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割有的酶要求识别序列两端有多个碱基的则必须先切否则就可能造成酶切失败2 回收PCR产物:回收的PCR产物片段=1:10 一般取前者后者取pmol为单位的DNA转换为为g单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650) 1000000 (注:
实验三 DNA限制性内切酶 消化酶切实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA限制性内切酶酶分子识别位点切割位点 限制作用是否需用 ATPⅠ类 三亚基双功能酶 二分非对称至少在识别位点外 1000bpYesⅡ类内切酶与甲基化酶分子不在一起4-6bp 大多数为回文对称结构 在识
双酶切概述 双酶切反应 (Double Digests) 1同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer以保证100的酶活性NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切由于内切
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验五DNA限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳 限制性内切酶EcoR I Restriction Enzyme识别序列: ------G↓AATT C ------ ------ C TTAA↓G ------Hind III Restriction Enzyme识别序列: ----
NTC442切片机回收汤经理15062687414 NTC442切片机回收 来源:NTC442切片机回收NTC442切片机回收NTC442切片机回收厂家NTC442切片机回收价格回收NTC442切片机2015年1月28日 - NTC-442DM切片机维修配件清单_机械仪表_工程科技_专业致力成为---国内最专业光伏行业的生产设备备件专家和国内外多家专业厂商合作经营NTC442切片机 :
实验 二琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测5.每100mg最初的凝胶重量加入150?l的异丙醇震荡混匀注意:加入异丙醇可以提高回收率加入后不要离心6.将上一步所得溶液加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中)12000 rpm离心30-60秒倒掉收集管中的废液注意:如果总体积超过750?l可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中
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