碱裂解法质粒的提取材料溶液I:葡萄糖50 mMTris-Cl () 25 mMEDTA () 10 mM高压灭菌15 min4℃保存溶液Ⅱ: M NaOH (临用前10M NaOH母液稀释)1 SDS临用前配制溶液Ⅲ:5 M KAc 60 ml冰醋酸 ml水 ml定容至100 ml高压灭菌4℃保存酚氯仿异戊醇(25∶24∶1):按24∶1的体积比在氯仿中加入异戊醇按体积体积1:1混合饱和酚与氯仿异
质 粒 提 取一导论 ? 已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA 这些方法都含有以下3个步骤:1. l (一)细菌培养物的生长 细菌培养物的生长2. l (二)细菌的收获和裂解 细菌的收获和裂解3. l (三)质粒DNA的纯化 质粒DNA的纯化?(一)细菌培养物的生长? 从琼脂平板上挑取一个单菌落接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)然后从中
质粒抽提从甘油菌或平板接种至50ml LB培养基37℃ 250rpm培养5-8h(早上做)1转接至2L LB培养基37℃ 200rpm 过夜5000rpm 10min离心收集菌体称重按10mlg菌 加入裂解液I(可用纯化水代替)重悬菌体置于冰上按10mlg菌 加入裂解液II小心混匀冰上放置5-10min按8mlg菌 加入裂解液III轻柔混匀室温放置5min10000rpm 10min离心收
分子生物学实验质粒提取Plasmid ExtractionEP管(eppendorf管)操作(理论上无菌)量程可调的微量移液器使用溴乙锭,致癌!报纸区域为污染区1)取15ml过夜培养的菌液于EP管,9000rpm离心30秒(一起离),弃尽上清。2)用250μl溶液P1重悬沉淀,枪头反复抽吸至菌体彻底悬浮。3)加250μl溶液P2,温和地上下翻转4~7次使菌体充分裂解,室温放置3min,直到溶液变得
实验二 质粒DNA抽提一 实验原理质粒是细菌DNA染色体外的小型双链环状DNA复制子对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成质粒提取方法包括三个步骤:细菌的培养细菌的收集和裂解以及质粒DNA 的分离和纯化本实验采取的碱裂解法分离质粒的原理:在碱性环境中线性的大分子量细菌染色体DNA被变性而共价闭环(CC)质粒DNA仍为自然状态将pH调至中性并在高
中量质粒抽提原理: 质粒中量抽提的原理及各试剂组成均有质粒小量抽提一致其主要区别在于中量质粒抽提所获得的质粒含量更高同时中抽试剂盒具有去类毒素的作用其原因可能与吸附柱中含有类似氢氧化铝等对类毒素有吸附作用的物质有关 类毒素是指由于变性或化学修饰而失去毒性的毒素但仍保留其抗原性医学微生物学中将类毒素定义为:将细菌外毒素用甲醛处理脱去其毒性保存其免疫原性即为类毒素仪器与试剂: 3M N
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第一部分 碱裂解法提取质粒一实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒 提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 二实验原理 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们在碱性pHDNA变性恢复中性时线性染色体DNA不能准确复性
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级质粒三种提取方法的比较基因工程原理与技术实验部分: 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子大小从1-200kb不等为双链闭环的DNA分子并以超螺旋状态存在于宿主细胞中质粒主要发现于细菌放线菌和真菌细胞中它具有自主复制和转录能力能在子代细胞中保持恒定的拷贝数并表达所携带的遗传信息 在细菌细胞内共
质粒中提实验步骤(. TM EndoFree Plasmid Midi Kit)实验前准备1. 使用前将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer并于室温保存D6915-01: 加入80ml无水乙醇D6915-03: 每瓶加入200ml无水乙醇D6915-04: 每瓶中加入200ml无水乙醇离心操作方案1. 将带有质粒的
质粒提取的原理发布日期2006-12-29 热门指数7118 收藏 碱裂解法从大肠杆菌制备质粒是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术可是我收研究生十几年了几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少追其原因我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤而没有对原理进行详细的论述这是导致我的学生误入歧途的主要原因后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究
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