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  双酶切buffer的选择：1U ：Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Itspatibility with the four standard NEBuffers is indicated by the chart.2BSA ：

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  双酶切概述　　 双酶切反应 (Double Digests)　　 1同步双酶切　　同步双酶切是一种省时省力的常用方法选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer以保证100的酶活性NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切由于内切

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  前一阵子一直在做双酶切质粒重组失败了 很多次不过很快改善了 实验方法用2周重组了 14个质粒现就自己的体会谈一下质粒重组的一些个人经验1回收PCR产物：在进行PCR扩增时候给引物两端设计好酶切位点一般说来限制酶的 选择非常重要尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶如BamHIHindIII提前看好各的双切酶所用公用的BUFFER以及各酶在公用BUFFER里的效率选好酶切位点后在各个酶的两边

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  Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表■ 说明使用二种酶同时进行DNA切断反应 (Double Digestion) 时为了节省反应时间通常希望在同一反应体系内进行TaKaRa采用Universal Buffer表示系统并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性尽管如此在进行Double Digestion

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  DNA的酶切实验采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接酶切可以是单酶切也可以是双酶切单酶切操作比较简单但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切2）先进行低盐要求的酶酶切然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求加入第二种酶进行酶切3）使用通用缓冲

• 双酶切连接反应的经验谈.doc

  双酶切连接反应的经验1 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近必须注意酶切顺序因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割有的酶要求识别序列两端有多个碱基的则必须先切否则就可能造成酶切失败2 回收PCR产物：回收的PCR产物片段=1：10　一般取前者后者取pmol为单位的DNA转换为为g单位的DNA：（X pmoles×长度bp×650） 1000000 （注：

• DNA限制性内切酶消化酶切.ppt

  限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA二分非对称5-7 bp 非对称实验材料和试剂反应 10×缓冲液2μL限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶消化1-2h但要完全酶解则必须增加酶的用量一般增加2-3倍甚至更多反应时间也要适当延长 酶切时所加的DNA溶液体积不能太大否则DNA溶液中其他成分会干扰酶反应 许多实验制备的D

• 限制性内切酶酶切位点汇总.doc

  AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点

• 限制性内切酶酶切位点汇总.doc

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