蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化 已有 2975 次阅读 2008-6-19 10:43 个人分类: =spaceuid=27729do=blogclassid=3273view=me 生活点滴 蛋白质印迹(Western blotting)方法原理和优化抽滤 抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法利用真空使溶解的样品滤过膜蛋白质吸附到膜上同时样品中其它成分被真
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Western Blot中文一般称为蛋白质印迹它是分子生物学生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息 HYPERLINK :baike.baiduimage8474fbddadafbafc77c63876 o 查看图片
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Western印迹实验目的实验原理 Western印迹杂交法是利用特异性抗体做探针对附着于固相支持体上的某些特异性蛋白进行鉴别和定量的方法它具有固相操作简便及不必对细胞进行放射性预标记
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分离纯化蛋白质的方法及原理(一)利用分子大小1透析:原理:利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质使蛋白质和其他小分子物质如无机盐单糖水等分开 方法:将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行 涉及的问题: 如何加快透析过程加大浓度差及时更换透析液利用磁力搅拌器 常用的半透膜:玻璃纸火棉和其他材料合成2超过滤:原理:利用压力和离心力强行使其他小分子和水通过半透膜而蛋白质留在膜上3凝胶
【实验目的】 了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用 【实验原理】 蛋白质印迹法又称为免疫印迹法这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术方法待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的分离和纯化另外这项技术的应用需要利用待测蛋白的单克隆或多 HYPERLINK =ArticleField=TitleKeyword=克隆 克隆抗体进行识别 如图所示可溶性抗原也就是待测蛋白首先要根
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质的分离提取SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹蛋白质的分离提取蛋白质分子在水溶液中因其表面带有一定数量的电荷及形成水化膜使其成为稳定的胶体颗粒在某些物理或化学因素影响下蛋白质颗粒由于失去电荷和水化膜而沉淀中性盐重金属盐三氯乙酸和乙醇等都是常用的沉淀蛋白质的试剂 Ⅰ蛋白质的盐析大量中性盐类如硫酸铵(NH4)2SO
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