经常有战友对一些常见问题在丁香园反复问答了很多遍所以希望园子中一些战友特别是低分与0分战友能将好的帖子归纳总结了一下并结合自己的经验整理一方面这是个学习提高的过程另一方面也能帮助大家解决这方面的问题同时如有不当或不完善的地方希望各位战友不断补充争取有朝一日我们能把园子里战友的经验系统整理给大家以帮助我先把设计引物如何设计酶切位点这方面的帖子整理一下因为昨天一下子看到三个相似问题原帖如下:我想
PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求 PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表1 酶 寡核苷酸序列 切割率% 2 hr 20 hr Acc I GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG 0 0 0 0 0 0 Afl III CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGT
PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表酶 寡核苷酸序列 切割率 2 hr 20 hr Acc I GGTCGACC CGGTCGACCG CCGGTCGACCGG 0 0 0 0 0 0 Afl III CACATGTG CCACATGTGG CCCACATGTGGG 0 >90 >90 0 >90 >90 Asc I GGCGCGCC AGGCGCGCCT TTGGCGCGCCAA >90 >90
引物设计原则:找出这种细胞物种的PTN全长核苷酸序列采用primer premier 软件设计引物设计应注意如下要点:1. 引物的长度一般为15-30 bp常用的是18-27 bp但不应大于38因为过长会导致其延伸温度大于74℃不适于Taq DNA聚合酶进行反应[2]2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高尤其是3端相似性较高的序列否则容易导致错配引物3端出现3个以上的连续碱基如GGG或CCC也会
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SP6:ATT TAG GTG ACA CTA TAG T7:TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 例如LPGAATTCATTTAGGTGACACTATAGATCCGCGTGAGAAGAGAGAA例如 RP GAATTCTAATACGACTCACTATAGGGTTCTTGCTGGTTTGCATGAG
连接互相匹配的粘性末端,产生新的酶切位点通常连接互相匹配的粘性末端可以产生新的酶切位点。以下组合是通过计算机程序计算出来的,尽管我们希望能尽量保证其准确性,但有些未经实验证实,因此不能保证100%的可行性。如果有同裂酶存在,则只列出其中的一个酶。本表中列出的内切酶均为已商品化的内切酶。识别序列不够严谨的内切酶(例如,识别多个序列的酶)只在括号内标出相关的序列,但注意这些酶不只切割该序列。-表示
增加PCR特异性(一)1.引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点: 1)典型的引物18到24个核苷长引物需要足够长保证序列独特性并降低序列存在于非目的序列位点的可能性但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异
如何设计新手用户引导引言:这篇文章是小柒墨轩淡月和我4个人一起工作的成果在今年9月的STS设计分享会上演讲过一次我们的设计分享会一共有4个演讲主题另外几个话题稍后会陆续在这里和大家见面一个新的网络产品或者一个全新的功能要想吸引用户的使用兴趣就需要让用户在刚一接触到的时候能够快速地了解它是什么能做些什么并且能马上开始一些简单的操作如果看了很久还没弄明白这些那么很可能就彻底放弃了所以设计新手用户
AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点
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