单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第三章 基因克隆载体(质粒载体)Review载体应具备的条件(P38) 1. 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)2. 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3. 具有多种单一的酶切位点(多克隆位点)4. 具有合适的选择性标记 自我复制表达外源基因的插入不影响其功能的发挥易于从宿主细胞分离出来5. 分子量尽可能小
Click to edit Master title styleClick to edit Master text stylesSecond levelThird level第二章 基因工程的基本条件一用于核酸操作的工具酶二基因克隆载体三目的基因的制备四基因工程受体菌或细胞二基因克隆载体(一)载体的功能及特征(二)质粒(三)噬菌体或病毒DNA(四)Cos质粒与噬菌粒(五)人工染色体载体(一)载体
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第二章 基因工程载体2012.09主要内容第一节 载体概述(重点)第二节 质粒载体(重点)第三节 噬菌体载体(重点)第四节 粘粒载体(理解)第五节 人工染色体载体(重点)第一节 载体概述(重点)基因载体定义为携带目的基因实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子常用载体质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA粘粒DN
= 1 \* ROMAN I 加样 酶(HS) 05ul前引物 1ul后引物 1ulHS(25)dNTP (25mM) 1ul 30s/1Kb buffer 5DNA 1ul灭菌水 165 ul 加完样后短暂离心后需将产物置于冰上数分钟后再放进PCR仪;点样时加5ul的marker,根据marker亮度来估算产物浓度。 II 目的片段回收,依据试剂盒说明书。最后一步用加热过的ddH2O溶解I
(一)重组T质粒的构建一.原理外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下有Mg2 ATP存在的连接缓冲系统中将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠
克隆载体:大多是高拷贝的载体,一般是原核细菌,将需要克隆的基因与克隆载体的质粒相连接,再导入原核细菌内,质粒会在原核细菌内大量复制,形成大量的基因克隆,被克隆的基因不一定会表达,但一定被大量复制。克隆载体只是为了保存基因片段,这样细胞内不会有很多表达的蛋白质而影响别的工作。?????? 克隆载体(Cloning vector ):携带插入外源片段的质粒或噬菌体,从而产生更多物质或蛋白质产物。(这
实验三 外源DNA片段在质粒载体中的克隆DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化目的片段的获得及纯化目的片段与克隆载体的体外连接重组子的筛选和鉴定等内容DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分实验目的:学习DNA的酶切纯化及外源片段与载体的连接将BAC克隆所携带的外源DNA酶切片段亚克隆到pUC18载体上实验材料:外源片段来自一个含有水稻DNA片段的BAC克隆的酶切片段克隆载体为P
pBR322的一些有用特性第三个优点是pUC8拥有多克隆单酶切位点这使有两个不同黏性末端的DNA片段(比如一端是被EcoRI酶切过的另一端是被BamHI酶切过的)可以直接被克隆而不需求助于加入连接片段的操作其他的pUC载体拥有不同的限制性酶切位点具有更大的灵活性允许更多种不同的DNA片段被克隆此外这些载体中的限制性酶切位点与存在于M13mp 系列载体中的限制性酶切位点一样可以很方便的进行DNA测序
第三章 基因工程的载体按载体性质分转基因植物体系第一节 质粒载体102023412λ噬菌体为线性双链DNA的细菌病毒具有互补的12bp粘性末端感染细菌后粘端互补成双链环状全长48531bp含50多个基因四λ载体的克隆原理和步骤1通过裂解过程增殖λ载体2载体与外源DNA的酶切载体一般要纯化左路右臂并进行去磷酸化处理3外源DNA与载体的连接形成的是多联体4重组噬菌体的体外包装需要单独制备衣壳蛋白包
功能大肠杆菌的质粒(酵母的杀伤质粒是RNA编码毒性糖蛋白)③ 线形DNA ( linear lDNA)L结合EB多加溶菌酶裂解细菌细胞壁 过Dowex AG50W-X8柱子用数倍体积的 NaCL清洗去除EB大肠杆菌接合(conjunction)磺胺大肠杆菌素对不带Col质粒的大肠杆菌有毒A. 严紧型质粒(stringent plasmid)亲缘关系密切的质粒一般属于不亲和性质粒如野生型质粒与其衍生
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