功能大肠杆菌的质粒(酵母的杀伤质粒是RNA编码毒性糖蛋白)③ 线形DNA ( linear lDNA)L结合EB多加溶菌酶裂解细菌细胞壁 过Dowex AG50W-X8柱子用数倍体积的 NaCL清洗去除EB大肠杆菌接合(conjunction)磺胺大肠杆菌素对不带Col质粒的大肠杆菌有毒A. 严紧型质粒(stringent plasmid)亲缘关系密切的质粒一般属于不亲和性质粒如野生型质粒与其衍生
第三章 基因工程的载体按载体性质分转基因植物体系第一节 质粒载体102023412λ噬菌体为线性双链DNA的细菌病毒具有互补的12bp粘性末端感染细菌后粘端互补成双链环状全长48531bp含50多个基因四λ载体的克隆原理和步骤1通过裂解过程增殖λ载体2载体与外源DNA的酶切载体一般要纯化左路右臂并进行去磷酸化处理3外源DNA与载体的连接形成的是多联体4重组噬菌体的体外包装需要单独制备衣壳蛋白包
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第二章 基因工程载体2012.09主要内容第一节 载体概述(重点)第二节 质粒载体(重点)第三节 噬菌体载体(重点)第四节 粘粒载体(理解)第五节 人工染色体载体(重点)第一节 载体概述(重点)基因载体定义为携带目的基因实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子常用载体质粒DNA噬菌体DNA病毒DNA粘粒DN
Click to edit Master title styleClick to edit Master text stylesSecond levelThird level基 因 工 程——目的基因的克隆与基因文库的构建目的基因的克隆与基因文库的构建C PCR法B cDNA法A 鸟枪法D 化学合成法E 基因文库的构建目的基因的克隆与基因文库的构建 基因工程或D
第四节 基因工程抗体和抗体工程 抗体研究进展3个阶段: ①1890年白喉抗毒素多克隆抗体 ②1975年杂交瘤技术单克隆抗体 ③1994年基因工程抗体一噬菌体抗体库技术的基本方法⒈获取目的基因⒉抗体库技术的载体⒊淘筛⒋表达与鉴定二噬菌体抗体库技术的特点 ⒈模拟天然全套抗体库 ⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊可获得高亲和力的人源化抗体三基因工程抗体表达⒈原核细胞表达⒉真核细胞表达⒊转基因植物
一)黏性末端DNA分子间的连接 在DNA片段上某一酶切口处换成另一种酶切口5 P-3 5突出的末端 外源片段先用Klenow补平然后用TdT补加polyC载体片段也用Klenow补平加polyG退火不经连接即可转化目的是:不使酶切位点遭受破坏 ployG退火用化学合成法合成的一段10-12bp的特定限制性内切酶识别位点序列的平端双链1978年康内尔大学的吴瑞教授发明Blunt-en
Click to edit Master title styleClick to edit Master text stylesSecond levelThird level第二章 基因工程的基本条件一用于核酸操作的工具酶二基因克隆载体三目的基因的制备四基因工程受体菌或细胞二基因克隆载体(一)载体的功能及特征(二)质粒(三)噬菌体或病毒DNA(四)Cos质粒与噬菌粒(五)人工染色体载体(一)载体
基因工程概论The transforming principle is DNA.多肽与基因之间存在对应关系 现在普遍认为一种多肽就有一种相对应的基因因此基因的转移或重组可以根据其表达产物多肽的性质来检查 技术上的三大发现Eco RINer动物中表达基因组DNA从复杂的生物有机体基因组中经过酶切消化或PCR扩增等步骤分离出带有目的基因的DNA片段在体外将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够
Click 1 大肠杆菌基因工程切不同粘性末端的连接同种内切酶生产的粘性末端的连接CTTAA5 AATTC AATTCCTTAAGCCTAGGTG5 CCTAGACTAGGCCTAGGCTGCA5切平GGATCCCTAGCCTTAA 5补平5GGGGGGTTAAG5人工粘性末端的连接 3突出末端3 GTACGPst IC GGGGGGACGTC5GACGTCCCCCCGTACG
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