增加PCR的特异性: 1. primers design 这是最重要的一步理想的只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件 a. 足够长18-24bp以保证特异性.当然不是说越长越好太长的primer同样会降低特异性并且降低产量 b. GC 4060 c. 5端和中间序列要多GC以增加稳定性 d. 避免3端GC rich 最后3个BASE不要有GC或者最后5个有
实验四 PCR扩增技术一.实验目的及背景 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术此法操作简便 可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝PCR技术虽然问世仅数年时间 但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域引起了生物技术发展的一次革命目前它在分子克隆 目的基础检测遗传病的基因诊断法医
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RT-PCR原理与实验技术一知识背景:1基因表达:DNA RNA Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA(每个mRNA存活4d可以合成105个丝心蛋白) 共合成109个丝心蛋白 因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的 2PCR技术(Polymerase
5Target Sequence33Primer 2③ 引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下以dNTP为反应原料靶序列为模板按碱基配对与半保留复制原理合成一条新的与模板DNA 链DNA聚合酶Target SequenceTAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG2 cycle = 4 Amplicon模板引物Taq DNA聚合酶4种dNTP混合物Mg210
1取小鼠肝脏约(约绿豆大小)置匀浆器中加入1ml TRIzol充分匀浆2将匀浆后样品转入Ep管离心数秒取250ul上清至一新Ep管中3每管样品中加入50ul氯仿(萃取酚)充分振荡混匀静置10min 412000rpm×10min5取上清转入新Epg管加等体积异丙醇混匀室温放置10min 612000rpm×10min7弃上清加入50ul 70乙醇洗涤一次自然晾干8加入50ul DEPC水溶解沉淀7
实验二基因的PCR扩增技术一实验目的1学习PCR反应的基本原理与实验技术2从BCG基因组DNA中PCR扩增Rv1791(PE19)基因二基本原理1PCR类似于DNA的天然复制过程2将待扩增的DNA片段与其两侧互补的两段寡核苷酸引物经变性退火和延伸若干个循环后DNA扩增倍数可达2n倍3DNA的变性和复性 1)加热或强酸碱性作用可以使 DNA双螺旋的氢键断裂双链解离形成单链DNA这称为 DNA的变性2
PCR和RT-PCR技术PCR基础聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列这是一个指数增长的过程因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术一般经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到反应包括几个成分(表1)模板可以为纯化的基因组或质粒DNA由RNA转化得到的cDNA或未经纯化的粗制生物样品如
(一)仪器设备??? 英国Thermo Hybaid原位PCR仪 ??? (二)操作流程 ???? 1原位PCR步骤???? 1)预处理:???? (1)切片常规脱蜡???? (2) HCl处理10min???? (3)5μgml蛋白酶K消化组织37℃10min???? (4)Nase消化组织37℃ 30min???? (5)梯度酒精脱水室温干燥???? 2)原位扩增:???? (1)切片滴加特异
PLLVCO技术经验总结?锁相环通常由鉴相器(PDPhase Detector)环路滤波器(LFLoop Filter)和压控振荡器(VCOVoltage Controlled Oscillator)三部分组成目前常用锁相环有整数分频和小数分频两种衡量锁相环性能的主要指标包括输出频率跳频范围跳频步进锁定时间相位噪声杂散频率稳定度和频率准确度等在设计PLL时需要考虑方面很多下面总结一些PLL设
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