DNA的亚克隆综合实验方案班级:生物科学1班 :魏小笛 :108012011087一实验学时:3?二实验类型:综合性实验?三实验要求:必修?四实验目的对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆其目的在于对目的DNA进行进一步分析或者进行重组改造等五实验内容(1)目的DNA片段和载体的制备(2)目的DNA片段和载体的连接(3)连接产物的转化(4)重组子筛选六实验过程一目的DN
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专题:基因克隆与亚克隆Transformation selection(introduce the plasmids into host cells)Plasmid pSC101A simple example of DNA CloningPlasmid preparation (vector)Gel analysis and fragment orientation
DNA克隆常见问题分析及解决方案连接反应的分类(以PCR产物克隆为例)不对称粘性末端连接载体与外源DNA连接处的限制酶切位点消失重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝非重组克隆的背景较高 DNA定量分析重组质粒筛选对照插入片段(700 bp 50 ngμl) 1 μl 3. 检测对策未加IPTGX-Gal或其失效抗生素失活敏感菌亦能生长用于制备感受态的菌株退化丢失了某些重要因子 DNA克隆胶回收试剂盒载体谢谢大家
克隆形成实验细胞生长状况有关指标的检测方法一细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一所用材料为血球计数板巴氏吸管和显微镜细胞计数的基本步骤:(1)取清洁计数板和专用盖玻片用丝绸布轻轻拭干.(2)取细胞悬液0.3mL加入0.9mL结晶紫(或台盼至)染液混匀后滴半滴于血球计数板内以充满不外溢为宜也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中不要溢出也不要过少或出现气泡.(3)在显微镜下用10×物镜观察计
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重组质粒的连接转化及筛选第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单质粒要比其它任何载体都要好在质粒载体上进行克隆从原理上说是很简单的先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段 然后体外使两者相连接 再用所得到重组质粒转化细菌即可完成但在实际工作中 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的通过调整连接反
连接经验分享来源:.ggene:基因时代时间:08-07-13 点击: 做了快一年的分子克隆犯了很多错误经历了很多坎坷也学到了很多东西分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了大家抱怨的也最多我也陷入在个步骤上很久经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会在这里跟大家分享一下我的经验以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考关于连接的提问多集中在连接的体系DNA的用量ve
\* MERGEFORMAT13 2011030014 宋予晴Title: DNA Cloning and Rbinants ScreeningBackground:Objectives:Learn the method of DNA purification by ethanol precipitation and understand the technique of DNA ex
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