细胞凋亡的检测与分析 DNA含量检测与细胞周期分析 胞内活性氧水平的检测与分析 细胞表面分子的检测与分析 组合实验easycheck优缺点:AnnexinⅤ-FITC结果分析 ——Guava原软件分析结果分析 ——Flowjo软件分析DCF
(三) 光学系统(五) FCM测量数据的的存储显示和分析双色荧光标记细胞散点图流式细胞仪的科研应用sG2脑栓塞病人血小板活化检测
免疫荧光标记 直接免疫荧光标记间接免疫荧光标记(二)间接免疫荧光标记法?取一定量的细胞悬液(约1X106细胞/ml)先加入特异的第一抗体待反应完全后洗去未结合抗体再加入荧光标记的第二抗体生成抗原—抗体—抗抗体复合物以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光常用的荧光染料(488波长激发)注意事项细胞凋亡 流式检测ISNT的流式细胞仪分析 流式检测细胞染色基本过程(以全血为例)
1检测指标:DNA倍体分析DNA含量分析细胞周期细胞凋亡细胞表面抗原分析:淋巴细胞免疫分型白血病及淋巴瘤免疫分型血小板相关抗体分析PNH相关抗原检测(CD55CD59)胞内细胞因子检测等2样本及来源:1)?细胞数量达到检测所需(细胞周期1x106细胞凋亡3x106)生长良好无污染附有细胞生长照片注明实验检测项目所需试剂盒来源于人小鼠大鼠或其它2)?外周血:EDTA或肝素抗凝全血5ml左右来源于人小
流式细胞仪实验方法实验准备标本制备:最小化非特异性结合:二凋亡1.凋亡的检测方法:和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法三细胞因子1.激活的细胞因子2.CBA四血小板1.活化2.活化检测3.网织血小板五红细胞1.网织红细胞2.PNH3.胎儿红细胞六肿瘤学1.DNA 细胞周期2.蛋白3.多药耐药4.微小残留白血病第一部分 标本处理一流式细胞术常规检测时的样品制备 (
流式细胞术 1. 流式细胞术(Flow CytoMeterFCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段它可以高速分析上万个细胞并能同时从一个细胞中测得多个参数与传统的荧光镜检查相比具有速度快精度高准确性好等优点成为当代最先进的细胞定量分析技术 2.特点1.测量速度快2.可进行多参数测量3.是一门综合性的高科技方法( FCM综合了光学电子学流体力学细胞化学免疫学激
思考题小结细胞组成钙离子 PH值 膜电位(3)数据处理系统荧光染料被激发发光光源光学信号简单单参数荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生发射的荧光波长与激发光波长不同每种荧光染料会产生特定波长的荧光和颜色通过波长选择通透性滤片可将不同波长的散射光和荧光信号区分开送入不同的光电倍增管选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征线性放大器和对数放大器偏转落入收集器充电一 参数
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级CpG-ODN的免疫刺激作用 陈军浩南京大学医学院附属鼓楼医院CPG概念为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列即CpG 基序一种免疫佐剂作用靶点TLR9细胞免疫体液免疫Th1免疫应答慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下HBV免疫耐受持续感染肿瘤微小残留病的清除CPG提高PBMC中Th1细胞Th1占淋巴细胞百分比CPG提高PBMC中T
第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求一免疫检测样品制备二免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三免疫胶乳颗粒的应用四流式细胞免疫学技术的质量控制 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下通过荧光探针的协助从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选 激素结合位点 (1) 液流系统 (2) 光学系统 (3) 数据处理系统signa
流式细胞术多色荧光检测是目前精细鉴定细胞亚群及分析不同细胞亚群功能的重要手段在国际和国内均得以广泛应用然而面对种类繁多的荧光染料如何知道这些染料是否适合您所拥有的流式细胞仪以及这些染料间的颜色补偿究竟有多大呢下面提供两个表格谨供参考希望能给您带来一丝感悟表1:荧光素特性及检测滤片 荧光素激发波长 (nm)发射波长(nm)长通滤片带通滤片eFluorTM450 405 407450--4404
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