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  提取原核表达蛋白Protocol李卫红2016-7预实验：Rosseta菌，37℃试管摇菌，过夜；第二天将菌液全部加入到100mlLB中（载体抗性：氯霉素，kana），37℃摇菌（约1-2小时后）测OD值：06-08；取1ml做诱导前对照，四度保存（跑蛋白胶前直接取样加loading buffer）；加入一定体积01M IPTG（终浓度为01mM）；（也可设计一系列浓度梯度和处理时间，寻找最适浓

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  原核表达步骤目的片段连接上pET系列质粒后通过测序确定编码序列的准确性(T7通用引物)。 ://对编码序列进行稀有密码子分析。在线网页 对稀有密码子较多（一般大于15%）的载体建议使用Transetta（DE3）化学感受态细胞进行转化对稀有密码子较少的构建载体使用BL21(DE3)化学感受态细胞转化感受态细胞之后涂板（含抗生素的培养基，一般是卡纳或氯霉素），过夜培养后挑单克隆进

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  分离胶：浓缩胶：SDS-试剂(1)30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(30%凝胶贮液)：292g丙烯酰胺，08g甲叉双丙烯酞胺溶于终体积为100ml的去离子水中，置于棕色瓶中4℃保存(2)15mol/L Tris-Cl(pH88)：1815gTris碱，溶于去离子水中，浓盐酸调pH至85，定容至100ml(3)l0mol/LTris-Cl(PH68)：6gTris碱，溶于去离子水中，浓盐酸调pH至

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