(5) 按要求加血清 (血清一般需经56℃30min灭活) 例如: 10胎牛血清 无血清培养液 900ml 灭活胎牛血清 100ml(6) 正压过滤除菌 (气压适当 防止滤膜破裂)(7) 分装贮存于4℃2周内用完(8) 无菌试验: 取样 37℃放置24-72h 无细菌霉菌污染方可使用将装有滤膜的滤器包装后高压蒸气消毒 ⑦过滤后的液体分装于贮液瓶
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级细 胞 培 养 池文杰一细胞培养的基本知识(一)培养细胞的特性1.培养细胞的生长方式贴附生长: 必须贴附于支持物表面才能生长见于各种实体瘤细胞悬浮生长:于悬浮状态下即可生长不需要贴附于支持物表面见于各种造血系统肿瘤细胞 2. 培养细胞的生长特点: a.贴附 贴附
材料: MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004) 6-well TC plate (or 35 mm TC dish) methanol glacial acetic acid 10 Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013) 步骤: 1. 以待测试培养基培养MDCK cell接种MDCK 细胞于6-well plate (或35mm
实验三 细胞培养技术与PCR一、实验目的:1、了解细胞原代培养、传代培养、细胞冻存和细胞复苏过程;2、掌握PCR的基本过程及原理。二、实验内容:1、细胞培养;2、PCR。三、实验过程:观看细胞培养技术视频和PCR技术视频,并回答一下问题:1、原代细胞培养和传代培养有何不同?2、超净工作台无菌操作注意事项(“三禁止”)。3、细胞培养间内一般用哪种显微镜观察培养的活细胞?4、PCR的基本过程?5、PC
缓冲液(): 配1000ml过滤(或高压消毒)分装于100ml螺口瓶贴壁细胞传代用(1瓶组备用2瓶 )量(gL) 液配1000ml取100ml用于配贴壁细胞消化液留取约200 ml备用量(gL).消化液:胰酶EDTA配100ml 过滤于100ml瓶用15ml离心管分装成8管1管组约12ml用于贴壁细胞实验台盘兰取克台盘兰溶于100 ml PBS中用于细胞记数5.细胞冻存液:(临用前配制)取18
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Caco-2细胞的培养技术费方利2007-12-30一细胞实验的准备工作培养基的配置DMEM培养基用滤器过滤后灭菌PBS的配置配10×的贮存液用时稀释120℃灭菌细胞冻存液的配置血清:DMSO=9:1二无菌操作70酒精擦拭超净台实验用品擦拭后放入超净台紫外灭菌30min擦拭双手点酒精灯小心取用无菌实验用品切勿碰触吸管与吸头头部
概念:培养的细胞由于细胞增殖数量增加细胞难以继续生长繁殖需要进行分瓶培养将培养的细胞分散以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养即为传代培养也叫做继代培养一般细胞可传代10-50代所谓细胞一代即从细胞接种到分离再培养的一段时间如某一细胞系为50代即该细胞已传代50次4加入12滴管含有血清的培养液反复吹打细胞使其成细胞悬液5以1:2或1:3进行分装补充新鲜培养基并在培养瓶上做好标记注明代
Remove all medium Adjust the cells concentration of 106107mlWashing cells Cell counting Load hemacytometerSubculture cells Upon confluency NoteUsing room temperature Ficoll-Hypaque solution underlay
1. 实验进行前无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌以70 ethanol 擦拭无菌操作抬面并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后才开始实验操作每次操作只处理一株细胞株且即使培养基相同亦不共享培养基以避免失误混淆或细胞间污染实验完毕后将实验物品带出工作台以70 ethanol 擦拭无菌操作抬面操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后再进行下一个细胞株之
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