单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式蛋白质的分离纯化第一节 能用作纯化依据的蛋白质性质第二节 蛋白质分离纯化的一般步骤第三节 蛋白质的分离纯化方法分离纯化蛋白质的目的: ①将蛋白质和非蛋白质杂质分离 ②将不同的蛋白质相互分离分离提纯蛋白质的要求:(1)纯度 (2)活性 (3)得率 (4)速度第一节 能用作纯化依据的蛋白质性质1
(一)如何分离得到球蛋白脱盐??-球蛋白带负电荷 纯化前后的?-球蛋白可用电泳法进行比较鉴定 2.凝胶层析:去除球蛋白中的无机盐 (脱盐)然后打开下端出口使样品进入凝胶床关闭出口 最多合并三管即可 将脱盐后含球蛋白的溶液加于DEAE-纤维素阴离子交换柱 上用乙酸铵洗脱样品进入柱床后立即开始收集洗脱液 检查各管的蛋白质分布情况合并含量高的各管三操作步骤 葡聚糖G-25 和DEAE纤维素:实验结
蛋白质的分离纯化技术联用及方法策略 摘要:蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域的热点而蛋白质在组织或细胞中是以复杂的混合物形式存在至今还没的单独或一套现成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来往往采取几种方法联合使用在不了解目标蛋白情况下应根据各种分离纯化方法的基本原理和应用情况设计纯化程序选择适宜的分离策略关键词:蛋白质分离纯化技术联用分离策略正文:蛋白质分离纯化是
第七章 蛋白质的分离纯化与表征一是非题1 一个蛋白质样品在某一条件下用电泳检查显示一条带因此说明该样品是纯的 ( ) 2 逆流分溶和纸层析这两个分离氨基酸的方法是基于同一原理 ( )3 蛋白质的SDS聚丙稀酰胺凝胶电泳和圆盘电泳是两种完全不同的技术 ( )4 凝胶过滤法可用于测定蛋白质的分子量分子量小的蛋白质先流出柱分子量大的后流出柱
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 蛋白质的分离纯化 (一)材料 1选材 2破碎 3混合物的分离 (二)粗分级 (三)细分级 蛋白质粗分级一盐析盐析:蛋白质在高浓度中性盐溶液中会沉淀析出 常用硫酸铵进行沉淀分级沉淀:通过调节硫酸铵的浓度可以使不同的蛋 白质分阶段沉淀下来优点:价格
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酶提取酶分离纯化不同阶段机械破碎通过各种化学试剂对细胞膜的作用而使细胞破碎盐溶液提取可与水混溶的有机溶剂2离心分离分离原理选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀而不影响所需的酶从而使酶与杂质分离密度梯度离心前用密度梯度混合器预先配制密度梯度系统贮液室与混合室的截面积关系决定梯度类型配制中将稀溶液置于贮液室B浓溶液置于混合室A 如图4-2(郭勇酶工程p96) 流出的梯度液经过导管小心收集于离心
蛋白质占干重 人体中(中年人) 人体 45 水55 细菌 5080 蛋白质19 真菌 1452 脂肪19 酵母菌 1450 糖类<1 白地菌50
实训二 血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定目的要求 1.了解蛋白质分离提纯的总体思路 2.掌握盐析法分子筛层析法离子交换层析等实验原理及操作技术 实验原理 血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类:清蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白和γ-球蛋白其中γ-球蛋白含量约占16100ml血清中约含左右 首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离此为盐
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