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  PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段使其能有效地扩增模板DNA序列因此引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构如这个区域单链能形成二级结构就要避开它如这一段不能形成二级结构那就可以在这一区域设计引物现在可以在这一保守区域里设计一对引物一般引物长度为1530碱基扩增片段长度为100600碱基对让我们

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  PCR 引物设计Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性与适当引物杂交再用DNA聚合酶延伸扩增DNA的设想1983年Mullis发明了PCR技术使Khorana的设想得到实现1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首比喻1989年为PCR爆炸年Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖 5? 5?

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  引物设计原则：找出这种细胞物种的PTN全长核苷酸序列采用primer premier 软件设计引物设计应注意如下要点：1. 引物的长度一般为15-30 bp常用的是18-27 bp但不应大于38因为过长会导致其延伸温度大于74℃不适于Taq DNA聚合酶进行反应[2]2. 引物序列在模板内应当没有相似性较高尤其是3端相似性较高的序列否则容易导致错配引物3端出现3个以上的连续碱基如GGG或CCC也会

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  琼脂糖凝胶电泳常用于临床检测（定性）聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好条带比较集中可用于科研及检测分析二甲苯青：水溶液呈兰色电泳时其迁移速率与双链线性DNA大致相当指示剂一般与蔗糖甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液作用：①增加样品密度使其比重增加以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指示带可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色使加样操作更方便普通电泳仪高压电泳仪紫外仪上观察电泳带及其

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  ①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。　　②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。　　③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。　　④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产

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  引物长度（primer length）产物长度（product length）序列Tm值 (melting temperature)ΔG值(internal stability)引物二聚体及发夹结构 （duplex formation and hairpin）错误引发位点（false priming site）引物及产物GC含量position） 反映了引物