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  万金油buffer?　 Dr. Burgess 这人特有意思喜欢吹嘘他发现的小trick比如他得意说他是全美国最早用coomassie blue染蛋白胶的人据他说六几年的时候他看到一个澳洲的老兄的一片文章讲述一种新奇的染料叫考马市亮蓝 比当时流行的染料amido black灵敏十倍以上所以他就写了一封信要了一些结果效果奇好我们听得都目瞪口呆?　不过Burgess最自豪的还是他的万金油buffer他

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  镍柱纯化His-tag蛋白我司用于纯化TEV蛋白酶我司镍柱的直径为d=50mm底面积S=20cm2高h=400mm实际填料高为h=250mm所以填料体积为V=500ml生产实验步骤用上样缓冲液平衡柱子和重悬细菌上样缓冲液配方（1L体积）40mM Na2HPO4 克10mM NaH2PO4 克 NaCL 29克1 甘油 10mL10mM 咪唑 克调节平衡

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  建议在中性或弱碱性（pH7-8）有氯化钠存在的条件下进行结合缓冲液和样品中含有盐能够消除离子交换效应但对蛋白主材的结合影响大磷酸缓冲液经常使用通常也可以使用Tris-HCl缓冲液但是当金属离子和蛋白的亲和力弱的时候应该避免使用因为它可能会降低结合强度避免在缓冲液中使用螯合试剂比如EDTA或柠檬酸咪唑经常用来洗脱组氨酸标签蛋白因为它可以通过和金属离子结合而高效地替换掉组氨酸应当使用低浓度的咪唑来洗掉

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  第二部分：蛋白的纯化如何区分蛋白表达在上清还是包涵体破碎细胞后离心分别收集上清和沉淀表达的蛋白可能分布在上清中也有可能分布在沉淀中还有可能是二者中都有分布根据我们实验室的经验超声碎菌之后如果菌液比较清亮沉淀比较少那表达的蛋白基本上是可溶的但如果超声完之后 菌液是浑浊的而且当离心之后离下的沉淀比较多而且沉淀的颜色也比较白那基本上就是包涵体了包涵体是基因重组蛋白在大肠杆菌中高水平表达时所形成 的

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  蛋白质的分离与纯化蛋白质分离纯化的基本流程 选择材料和预处理 细胞的破碎及细胞器的分离 蛋白质的抽提 蛋白质的纯化 浓缩干燥和保存一材料的选择和预处理 微生物植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料所选用的材料主要依据实验目的来确定 从工业生产角度考虑注意选含量高来源丰富及成本低的原料 对动物组织必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料先除去结缔组织和脂肪组织 对预处理好的材料若不立即