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Click The search for new specificities continues both biochemically by the analysis of cell-extracts andputationally by the analysis of sequenced genomes. Although most activities encountered toda
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实验十 载体构建实验目的: 能够综合运用DNA回收酶切连接转化质粒提取酶切鉴定筛选重组质粒等分子生物学技术 设计重组载体时的注意事项目的DNA插入克隆载体 在克隆载体的MCS中选择合适的酶切位点: 通过引物设计在目的片段两端加上酶切位点 注意在外源DNA片段的内部不会出现这些酶切位点目的DNA插入表达载体 除上述注意事项引物设计时还要注意读码框要和表达载体的读码框
实验三 DNA限制性内切酶 消化酶切实验原理限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA限制性内切酶酶分子识别位点切割位点 限制作用是否需用 ATPⅠ类 三亚基双功能酶 二分非对称至少在识别位点外 1000bpYesⅡ类内切酶与甲基化酶分子不在一起4-6bp 大多数为回文对称结构 在识
Click 注意 1)限制性核酸内切酶的类型及特性按限制酶的组成与修饰酶活性关系以及切断核酸的情况不同分为三类: Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型EcoR I 酶切位点:GAATTCHind Ⅲ 酶切位点: 未酶切质粒2. EcoRI 单酶切3. EcoR1Hind Ⅲ双酶切M. DNA Marker.
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DNA酶切及凝胶电泳第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子然后从底物上解离Ⅱ类由两种酶组成:
质粒DNA及λDNA的酶切连接转化及重组子的筛选鉴定陈倩倩 交流生 118627140313一实验目的:1学习和掌握限制性内切酶的特性2掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法3掌握利用CaCl2制备感受态细胞的方法4学习和掌握热击法转化的原理和方法5掌握α互补筛选法的原理6学习用试剂盒提取重组质粒DNA的方法7复习琼脂糖凝胶电泳的原理及方法二实验原理:重组质粒的构建需要对DNA分子进行
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第十章 重组DNA的构建筛选及鉴定分析1. 重组DNA导入宿主细胞2. 重组子的筛选3. 阳性重组子的验证与分析一 目的基因的获取5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 3Poly(A) RNA5 T12MN 3锚定引物逆转录5 MNAAAAAAAAAAAA(A)n 33M N TTTTTTTTTTTT 5变性
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