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质粒DNA的提取、纯化与鉴定南通大学江苏省神经再生重点实验室蒋茂荣 一、基因克隆的质粒载体1、定义 双链闭环DNA; 1kb--200kb; 独立存在于宿主染色体之外; 具复制起始点; 复制和转录不同程度依赖于宿主基因; 编码某些酶,使宿主具有特殊标志, 可供选择。2、载体性质(1)复制能力;(2)容纳外源DNA的能力;(3)选择标记:抗生素耐受。(4)引入多克隆位点;(5)引入重组选择标记。3、
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实验20 质粒DNA的提取与鉴定授课题目:质粒DNA的提取与鉴定(6学时)授课对象:生科专业授课教师: 教学目标及基本要求:1学习和掌握快速提取质粒DNA的原理和方法2学习和掌握质粒DNA的鉴定3采用开放性实验教学教学内容提要及时间分配:1实验原理讲解: 8分钟?碱变性法提取质粒DN
质粒DNA的提取和鉴定 实验二十四目的掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法;煮沸裂解;羟基磷灰石柱层析法,质粒DNA释放法;酸酚法等。概括起来主要是用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理所有分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离质粒DNA(有时还要求纯化质粒DNA,根据实验所需)选择哪一种方
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质粒DNA的提取纯化及验证一实验目的掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的使用并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理和方法二实验原理1碱变性提取法提取和纯化质粒DNA的方法很多目前常用的有:碱变性提取法煮沸法羟基磷灰石柱层析法EB一氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等其中碱变性提取法最为经典和常用适于不同量质粒DNA的提取该方法操作简单易于操作一般实验室均可进行提取的质粒DNA纯度高可直接用于
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质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
实 验 七 质粒DNA的提取和鉴定 目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA能从细菌中提出来又能再转入细菌这个过程称转化转入的质粒DNA仍能进行复制产生多个拷贝提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法煮沸裂解羟基磷灰石柱层析法质粒DNA释放法酸酚法等
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