PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板
目的基因PCR扩增产物的克隆 [实验原理]产物回收在高离子盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤去蛋白液和漂选液,将引物、核苷酸、蛋白酶等杂质去除,最后用低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。2T载体与PCR产物的连接源DNA与载体分子的连接就是DNA重组,这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在D
目的基因PCR扩增产物的克隆 [实验原理]产物回收在高离子盐存在的情况下,DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤去蛋白液和漂选液,将引物、核苷酸、蛋白酶等杂质去除,最后用低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。2T载体与PCR产物的连接源DNA与载体分子的连接就是DNA重组,这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在D
琼脂糖凝胶电泳常用于临床检测(定性)聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好条带比较集中可用于科研及检测分析二甲苯青:水溶液呈兰色电泳时其迁移速率与双链线性DNA大致相当指示剂一般与蔗糖甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液作用:①增加样品密度使其比重增加以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指示带可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色使加样操作更方便普通电泳仪高压电泳仪紫外仪上观察电泳带及其
目的基因片段的PCR扩增与克隆1. PCR技术Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应它是一种模拟天然DNA复制过程在有DNA模板DNA聚合酶(Taq酶)RNA引物和四种dNTP的情况下通过高温变性(90℃-95℃1-2min)低温退火(25℃-37℃1-2min)中温延伸(60℃-75℃90 sec-5min)这样反复循环的过程中在体外扩增特异性DNA片段的分子生
聚合酶链式反应(PCR)及酶切鉴定转化产物 一、实验目的二、实验原理三、实验试剂四、实验步骤五、注意事项讲授内容学习和掌握PCR的基本原理和实验技术学习和掌握限制性内切酶双酶切鉴定转化产物的基本原理和实验技术掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和实验技术一、实验目的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种通过体外酶促反应大量、快速、选择性地合成目的DNA片段的核
PCR扩增产物的电泳分析 凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便快速最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为6265℃溶解后在37℃下维持液体状态约数小时主要用于DNA片段的回收质粒与外源性DNA的快速连接等.(一)凝胶浓度:凝胶浓度的
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR基因扩增一实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术二实验原理PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法由美国人B.Mullis于1983年发明包括三个基本步骤:变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链退火(Ann
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PCR 扩增不出或扩增效率低的解决方法对PCR退火温度进行梯度设置(例:55℃±10℃)根据TM值来选择最适温度确认模板是否存在降解问题适当调整模板引物聚合酶的量反应体系里补加甜菜碱(终浓度为1M)DMSO(总体积的1-5注:加过多会影响酶的活性)如果模板是菌液未扩增出的可选用所提的质粒再做PCR扩增 更换其他DNA聚合酶做小试实验(PfuFastpfuKOD)目前首选聚合酶为Pfu在扩增不出
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