cDNA文库的构建分为六个阶段:阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链阶段2:cDNA第二链的合成阶段3:cDNA的甲基化阶段4:接头或衔接子的连接阶段5:Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA阶段6:cDNA与λ噬菌体臂的连接[阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链]1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成:poly(A) RNA (1μg/μl) 1
一,引物设计:1,选择合适的载体。酶切位点及其顺序(酶切位点的顺序一定不能颠倒)。2,在NCBI上再次确认目的片段的碱基序列。1,首位20个碱基保护碱基4个上游酶切位点使用word排除目的片段里含有的酶切位点,最后确定所使用的酶。2,设计引物:primer-up: -- -------末尾20个碱基的反向互补碱基保护碱基4个下游酶切位点Primer-down:----- ------3,核对--
Nuclear Protein Extraction ProtocolBufferA: 10mM HEPES, pH 79 for 50ml, add500ul 1M HEPES, pH 7910mM KCl 500ul 1M KCl01mM EDTA50ul01M EDTA01mM EGTA50ul01M EGTA 489ml ddH2OJust before use, add 50ul 10
1已经画好坐标轴,需要把坐标轴右侧和上侧也连上,成一封闭的。如何做?点中坐标轴右击,再选Title & Format,里面依次有bottom, top, left, right。选Top, 打钩show axis & tick,就会显示上边的坐标轴。如果不需要轴上的标尺,则在Major和Minor中选择none。右边的线同上。Major和Minor的作用是标尺的刻度线向上(in)还是向下(out
肿瘤细胞侵袭实验(Tumour Invasion Assay)肿瘤细胞侵袭实验(Tumour InvasionAssay)可以:(1)研究各种细胞因子对恶性肿瘤细胞侵袭和转移的影响;(2)一些抑制血管生成的新药研究;(3)研究肿瘤细胞侵袭和转移机制。实验方法* Matrigel 基质膜模型实验方法原理Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分,含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多
【爬片的准备】1爬片可用一般的盖玻片,也可用专用爬片;2应用盖玻片,可根据自己的需要剪裁成合适的大小,以备置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮,或者是口腔科的那种小沙轮,轻轻划一下后,稍用力一掰就分开了。如果接种大皿的话,我一般不将盖玻片切开,直接清洁后放入培养皿中,到染色时再将之切开,这样既保证了细胞均一性,又可同时做几个指标的染色。3将剪裁好的爬片,置
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程一、原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀
细胞凋亡实验步骤及注意事项一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界,在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合,是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴
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