第一节 质粒和质粒提取Chapter 1 Plasmid and Plasmid extract理想克隆载体的特性BamHI3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增收集和裂解细胞分离和纯化质粒DNA用溶菌酶破坏菌体细胞壁十二烷基磺酸钠(SDS)裂解细胞膜经溶菌酶和SDS处理后细菌染色体DNA会缠绕在细胞碎片上而质粒比细菌染色体DNA小得多所以3000-5000g离心后质粒留在上清液中1 LB液体
levelThird level levelThird level levelThird level levelThird level levelThird level重组DNA技术与基因工程5 2 3 4 1 6 重组DNA技术与基因工程的基本概念重组DNA技术所需的基本条件重组DNA技术的操作过程目的基因的克隆与基因文库的构建外源基因在大肠杆菌中的表达外源基因在酵母中的表
DNA重组技术(基因工程)的应用核酸外切酶:从核酸的一端开始一个 一个的水解核苷酸或其大片段(Klenow)多核苷酸激酶磷酸酶一.质粒二.噬菌体已将COS位点接入PBR322质粒的抗氨苄青霉素基因上形成了装配型质粒这种质粒可以容纳大至35—40kb的外源DNA(而λ—噬菌体DNA只能容纳16kb) 所以适用于克隆真核细胞大片段基因装配型质粒也带有复制起点与抗四环素基因DNA重组的步骤:
第三章 动物基因工程基础核酸内切限制酶的类型及其主要特性3种不同的亚基寄主特异性的位点无用EcoRI特异识别GAATTC及其互补碱基组成的双链片段3γ32P ATP5突出末端定义:质粒是能自主复制的双链环状DNA分子它们在细菌中以独立于染色体之外的方式存在②λ噬菌体也可以进入溶源循环即注入的DNA整合到大肠杆菌的染色体中以前噬菌体的形式潜伏起来永久保留整合/切割区域真核生物由多细胞组成有明显的
(一)基因工程的概念DNA分子水平普通棉花(无抗虫特性)基因工程培育抗虫棉的关键步骤:关键步骤一的工具:关键步骤二的工具:关键步骤三的工具:1.特点:特异性即识别双链中特定核苷酸序列在特定的切点切割2.分布:主要在原核生物中3.结果:产生黏性末端(碱基互补配对)平末端举例:大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别GAATTC序列并在G和A之间切开形成黏性末端SmaⅠ能识别CCCGGG序列并在C和G
生物化学与分子生物学 DNA重组和重组DNA技术DNA Rbination and Rbinant DNA technology第二十一章DNA重组(DNA rbination)是指不同DNA分子断裂和连接而产生DNA片段的交换并重新组合形成新DNA分子的过程。重组DNA技术(rbinant DNA technology)是指在体外将两个或两个以上DNA分子重新组合
生物化学与分子生物学 DNA重组和重组DNA技术DNA Rbination and Rbinant DNA technology第二十一章DNA重组(DNA rbination)是指不同DNA分子断裂和连接而产生DNA片段的交换并重新组合形成新DNA分子的过程。重组DNA技术(rbinant DNA technology)是指在体外将两个或两个以上DNA分子重新组合
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 基因工程The camelecow定向基因改造设想 设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮能否让细菌吐出蚕丝设想二能否让微生物产生出人的胰岛素干扰素等珍贵的药物设想三 经过多年的努力科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程基因工程产品抗虫害的玉米转鱼抗寒基因的番茄转基因鲑鱼转黄瓜抗青枯病基因
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第四部分 DNA重组技术--DNA的酶切回收和连接转化DNA的酶切反应 分子生物学中经常使用的是II型限制性内切酶它能识别双链DNA分子中特定的靶序列(48bp)并在该序列内切断DNA形成特有的粘末端或平端 一实验目的掌握DNA酶切的基本原理学习和了解限制性内切酶的使用方法学习和掌握DNA片段胶回收的方法 二实验原理1.
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Chapter35 DNA的重组与基因工程基因重组与基因工程 Genetic rbination Chapter35 DNA的重组与基因工程一DNA的重组的分类同源重组特异位点重组和转座重组等类型二自然界的基因转移和重组 自然界的基因转移和重组是无目的 基因工程有目
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