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  细胞培养的基本知识操作前准备工作: 1玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;2无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;3培养基(pH72)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物分装

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  第四节动物细胞的培养条件和培养基细胞体外培养基本条件:①无菌②营养充足,防止有害物质③氧气④随时清除代谢有害物质⑤良好的生存外环境⑥及时分种一、动物细胞的培养条件⒈器材的清洗和消毒 ⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌物理消毒 化学消毒⒉ 水质 :电阻值大于18MΩ,去热原。⒊ pH:72～74⒋ 渗透压:290～300mOsm/kg⒌ 温度:37±05 C⒍ 空气:氧的饱和质

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  常用设备 准备室的设备： 单蒸馏水蒸馏器双蒸馏水蒸馏器酸缸烤箱高压锅储品柜(放置未消毒物品)储品规(放置消毒过的物品)包装台配液室的设备：扭力天平和电子天平(称量药品)PH计(测量培养用液PH值)磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)培养室的设备：液氮罐储品柜(存放杂物)日光灯和紫外灯空气净化器系统低温冰箱(-80℃)空调二氧化碳缸瓶边台(书写实验记录)必须放在无菌间的设备：离心机(收集细胞)超净

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  细胞培养动物细胞培养工作的基本要求培养前准备：做好实验计划和操作程序准备好所需器材和物品操作间消毒：紫外线照射30min实验结束后75酒精擦拭工作台洗手和着装：穿拖鞋无菌衣带帽子口罩洗手后带手套火焰消毒：首先点燃酒精灯一切操作均需在火焰近处并经过烧灼进行注意：⑴金属器械灼烧的时间不可太长以防退火⑵吸过培养基的吸管不能再用火焰灼烧⑶开启关闭长有细胞的培养瓶时灼烧时间要短⑷胶塞过火焰不可时间长5实验中

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  培养基的配制：实验步骤：在超净台内安装好滤器用去离子水溶解1640培养基并用磁力搅拌器搅拌2 h使之充分溶解在超净台内过滤分装到250 mL的玻璃瓶内用封口膜封好-20℃保存过滤结束时还要取少许培养基进行菌培验证培养基是否是无菌?胎牛血清的处理：没有灭活的血清中含有补体成分需要将血清在56℃条件下灭活30 min在水浴锅内进行灭活的过程中要不停地摇晃使受热均匀防止沉淀析出来注意：刚取出的冻存