实验十 载体构建实验目的: 能够综合运用DNA回收酶切连接转化质粒提取酶切鉴定筛选重组质粒等分子生物学技术 设计重组载体时的注意事项目的DNA插入克隆载体 在克隆载体的MCS中选择合适的酶切位点: 通过引物设计在目的片段两端加上酶切位点 注意在外源DNA片段的内部不会出现这些酶切位点目的DNA插入表达载体 除上述注意事项引物设计时还要注意读码框要和表达载体的读码框
#
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 ESAT6-CFP10重组基因载体构建1 ESAT6CFP10引物设计2 ESAT6CFP10目的基因PCR扩增3 pET30a-ESAT6质粒的构建4 pET30a-ESAT6-CFP10质粒构建1 ESAT6CFP10基因引物设计ESAT6基因引物(Oligo6.0软件设计引物设计演示) Upper P
构建载体1PCRPCR技术的基本原理 ⑴PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应.DNA聚合酶以单链DNA为模板借助一小段双链DNA来启动合成通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合形成部分双链.在适宜的温度和环境下DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端并以此为起始点沿模板5′→3′方向延伸合
#
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级慢病毒载体的构建背景知识病毒载体 是一种常使用于分子生物学的工具可将遗传物质带入细胞原理是利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞进行感染的分子机制可发生于完整活体(in vivo)或是细胞培养(in vitro)中可应用于基础研究基因疗法或疫苗
TRV2空载体连接目的片段设计引物:在NCBI中查到目的基因的片段,在primer中设计引物,靠近3’端,因为3’端特异性比较强,目的片段在200-500bp都可以。加酶切位点,再加保护性碱基。PCR扩增出目的片段,然后酶切,连接到TRV载体,转化到大肠杆菌中,测序,提取质粒,电转到农杆菌中PCR鉴定。
基因敲除小鼠的构建 利用同源重组技术进行打靶载体的构建孔 冬小鼠遗传学实验室南京大学模式动物研究所基本原理传统意义上的打靶载体的构建受基因组DNA上限制性内切酶位点的强烈局限。考虑到后期利用Southern杂交进行阳性克隆筛选时的内切酶是否可以区分重组和野生型染色体,同时顾及同源臂两端的内切酶是否能与常用载体的多克隆位点相匹配,最后可供我们进行选择的打靶区域往往非常有限。而近年来发展起来的基于噬菌
shRNA干扰载体构建SOP目录第一部分RNA干扰原理及shRNA设计4第二部分酶切与回收7第三部分退火与连接9第四部分转化与涂平板11第五部分挑菌与菌液PCR13第六部分质粒提取15第一部分RNA干扰原理及shRNA设计标准操作规程(SOP)1目的:了解RNA干扰原理,设计shRNA干扰序列2仪器与设备:需要能够连接Internet的个人计算机,引物设计相关软件(如Primer Premier
#
违法有害信息,请在下方选择原因提交举报