SDS碱裂解法制备质粒DNA: 大量制备用碱和SDS处理可以从大规模(500ml)的细菌培养物中分离质粒DNA所获得的质粒则可通过柱层析或CsCl-溴化乙锭梯度离心进一步纯化:材料:缓冲液和溶液:碱裂解液I:50mmolL 葡萄糖25mmolL Tris-HCl ()10mmolL EDTA ()(溶液I一次可配制100ml在15psi[]压力下蒸汽灭菌15min保存于4摄氏度)碱裂解液II: N
实验一 质粒DNA的微量制备(4学时)实验目的了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用掌握碱裂解法分离纯化质粒DNA的方法 实验原理质粒(Plasmid)是一种双链的共价闭环状的DNA分子它是染色体外能够稳定遗传的因子质粒具有复制和控制机构能够在细胞质中独立自主的进行自身复制并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数目前质粒已广泛的用作基因工程中目的基因地运载工具—载体从大肠杆菌中提取质粒
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验八质粒DNA的小量制备一般操作步骤:培养细菌使质粒扩增收集和裂解细菌分离质粒DNA碱变性法煮沸法去污剂法有机溶剂法一实验目的掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理熟悉碱裂解法提取质粒DNA的方法分离质粒DNA需要去除的:大肠杆菌染色体DNA蛋白质RNA二实验
中华医药杂志
实验二 质粒DNA抽提一 实验原理质粒是细菌DNA染色体外的小型双链环状DNA复制子对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成质粒提取方法包括三个步骤:细菌的培养细菌的收集和裂解以及质粒DNA 的分离和纯化本实验采取的碱裂解法分离质粒的原理:在碱性环境中线性的大分子量细菌染色体DNA被变性而共价闭环(CC)质粒DNA仍为自然状态将pH调至中性并在高
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质粒DNA的提取一、原理采用碱变性发抽提取质粒DNA。该法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性预复性的差异而达到分离目的的。在PH大于12的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH52的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,保存在溶液中。而染色体DNA不能复
总DNA 质粒 重提质粒酶切检测 PCR检测 质粒酶切后回收产物的检测 重提质粒检测 快检 PCR酶切产物的检测图 :
质粒DNA的提取一、原理采用碱变性发抽提取质粒DNA。该法是基于染色体DNA与质粒DNA的变性预复性的差异而达到分离目的的。在PH大于12的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂,但超螺旋共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离,当以pH52的乙酸钠高盐缓冲液调节其pH至中性时,变性的质粒DNA又恢复到原来的构型,保存在溶液中。而染色体DNA不能复
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