第五章大肠杆菌克隆策略大肠杆菌克隆以大肠杆菌为克隆宿主,是基因工程操作最常见的克隆方式转化或转染入大肠杆菌克隆策略举例:1)克隆基因组DNA2)克隆cDNA文库3)差异克隆4)定点诱变第一节 克隆基因组DNA基因组文库文库法克隆将所研究生物材料的所有DNA不加选择地分离成若干易于处理的片段,并全部克隆的研究方式。这样一个克隆的集合代表了整个起始材料的DNA,称为文库。依据文库的DNA来源与组成
非复制型载体 瞬时转染的载体(启动子功能分析的载体) 选择标记DNA带有病毒复制子的质粒 SV40BPVEBV病毒转导载体 腺病毒杆状病毒牛痘病毒Lentivirus等两个物理上不相连的基因通过共转染共同整合到基因组中的现象这是由于发生了整合之前的DNA融合只要能同时转入一个选择标记基因共转化现象就可以使任何外源DNA序列稳定转入哺乳动物细胞根据标记基因筛选方法选择标记可以分为:内
第一章 基因工程第二节 基因工程的原理和技术基因工程的基本原理:让人们感兴趣的基因(目的基因)在宿主细胞中稳定和高效表达基因工程的基本操作步骤:1获得目的基因2形成重组DNA分子3将重组DNA分子导入受体细胞4筛选含有目的基因的受体细胞5目的基因的表达一目的基因的获取1目的基因主要是指______________________请举出三个以上的例子2获取目的基因的方法(1)从基因文库中
Click 1 大肠杆菌基因工程D 酵母菌的转化系统7 酵母基因工程不含有特异性的病毒不产内毒素美国FDA认定为安全的裂殖酵母属 如非洲酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)ssc11 改善重组蛋白分泌 羧肽酶Y突变类型基化缺陷株非常重要靶蛋白减少泛素依赖型蛋白降解作用的突变宿主菌七个泛素连接酶基因的突变对衰减蛋
基因工程概论The transforming principle is DNA.多肽与基因之间存在对应关系 现在普遍认为一种多肽就有一种相对应的基因因此基因的转移或重组可以根据其表达产物多肽的性质来检查 技术上的三大发现Eco RINer动物中表达基因组DNA从复杂的生物有机体基因组中经过酶切消化或PCR扩增等步骤分离出带有目的基因的DNA片段在体外将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够
非编码区终止子能够编码蛋白质的序列叫做外显子 原核细胞不具有剪切拼接mRNA的能力所以真核细胞的基因不能在原核细胞的受体细胞中正确表达都由能够编码蛋白质的______ 和具有调控作用的______ 区组成的苏云金芽孢杆菌直接分离基因人工合成基因蛋白质的氨基酸序列PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术通过此技术可获取大量的目的基因模板DNADNA引
分支杆菌菌种鉴定研究进展摘 要:由于全球范围内肺结核及非结核分支杆菌病的发病呈逐年上升趋势准确而快速的菌种鉴定技术对结核病的诊断和鉴别诊断及有效化疗都有极其重要的意义目前国内外采用传统的分支杆菌菌种鉴定方法需依据细菌生长速度色素产生及多种生化试验等结果综合分析才能获得结果 而BACTECTB460TB960培养基系统虽快(2-6d)但只能初步鉴定结核分支杆菌复合群和非结核分支杆菌不能将细菌鉴定至种
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 互换工程简介张玉鹏华师大金统学院5.1 引言? 金融机构投资者以及大并非对有形的股票债券或信用产品本身有什么特别的偏好他们所希望的只是从股票价格或利率敞口中获益或是对冲与它们相关的风险? 在这里必须有商品作为原材料但即使这样人们的目的也不是买卖商品本身而是买卖与商品价格有关的风险? 买卖现金资产有很多负面影响:–
(2) 所用的试剂作用⑥ RNase A⑧ 酚-氯仿②引物的长度3端(特别是最末及倒数三个碱基)必须与模板严格配对5端可以不配对GACGG53CAGGACTTAGTCACT5Tm值是指溶液中有半数的DNA分子解链为单链时的温度两条引物的Tm值尽可能相等或相近最好相差不超过2 oC94℃ 4 min (预变性) 94℃ 30 sec 60℃ 30 sec 72℃ 2 min
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第一章 基因工程第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生现代生物学技术和生物工程基因工程及理论基础工程酶的发现及作用基因工程的诞生限制性核酸内切酶——基因的剪刀DNA连接酶——基因的针线质粒——基因的运载体练习生物学技术利用生物学手段定向控制生物或改造生物以获得优良的生物或所需的生物产品现代生物学技术的特征对生物材料的机
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