核酸杂交的基本理论核酸探针核酸分子杂交方法蛋白质分子杂交切口平移法(nick translation)随机引物法聚合酶链式反应法 T4多核苷酸激酶标记DNA5末端DNA快速末端标记化学标记技术:直接与核酸进行化学反应而连接在核酸上非放射性同位素 固相杂交 菌落原位杂交(Colony in situ hybridization) 斑点杂交(Dot blot)
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第九章 离子交换分离技术一离子交换原理及分类二离子交换树脂的理化性能和测定三离子交换过程的理论基础四离子交换的应用五生化用离子交换剂的特点和种类离子交换分离法 利用离子交换剂与
第二节 分子杂交及相关技术 分子杂交标记的探针DNA变性后与变性后的靶DNARNA通过碱基互补配对结合形成杂种分子的过程 分子杂交包括:DNA-DNA杂交DNA-RNA杂交及蛋白杂交等 分子杂交的目的就是运用特异的探针鉴定复杂的靶DNA中同源的DNA片段 1双链probe或DNA解链主要取决于: 1.链的长度:链越长需要的 能量多才能解链 2.碱基成分:GC含
6 琼脂糖凝胶SOUTHERN杂交试剂:025M HCl: 500ml 水中加 10ml HCl。(36-38%浓HCl为117-12M)04M NaOH: 1000ml水中加 16g NaOH。步骤:1.将拟南芥的基因组DNA(10-50ug)完全酶切, 用400?l 酶切体系酶切过夜(14h)。(此过程不能加入RNase)2.加入400 ?l氯仿,剧烈震荡。3.13200rpm 离心5 mi
20224161第四节 分子杂交与印迹技术Molecular Hybridization Blotting Technology一 分子杂交简介二核酸杂交技术三蛋白杂交技术四基因芯片分子杂交与印迹技术一分子杂交简介1.概念 凝胶电泳分离待测DNARNA或Pr并转移固定到结合物上然后与探针抗体杂交分析2.原理 碱基互不配对(核酸变性和复性)抗原-抗体反应3.分类(常用分子杂交技
核酸的变性和复性已知核酸序列能特异性地探测带某一特定序列的DNA或RNA分子可用放射性同位素或其他标记物标记与样品中互补序列发生特异的碱基配对结合然后用放射自显术或其他显示系统检测出来广泛用于分子杂交技术基因突变主要操作步骤谢谢
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第六章离子交换分离技术 离子交换法: 应用离子交换剂作为吸附剂通过静电引力将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上然后用合适的洗脱剂将吸附物从离子交换剂上洗脱下来从而达到分离浓缩纯化的目的 优点: 所用介质无毒性可反复再生使用少用或不用有机溶剂设备简单操作方便劳动条件较好 离子交换剂人工高聚物作载体的离子
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